本文对发菜细胞培养液中多糖含量的测定方法、发菜多糖的提取和初步分离纯化进行了研究,并开发研制了以发菜细胞培养液和发菜多糖为主要原料的两个产品。 苯酚—硫酸法及蒽酮—硫酸法是测定多糖含量常用的比色法。通过试验分别对两种测定方法的稳定性、重复性、回收性及培养基中离子对测定结果的干扰程度进行比较。试验结果表明:两种方法的测定精度、稳定性、重复性等较好。培养基中的离子对两种方法的测定结果均有显著影响,因此待测样品应先去除离子后再进行测定。在测定多糖含量较少的样品时,苯酚—硫酸法更为适用。 培养过程中筛选得到形态上有明显差异的两类发菜细胞:Ⅰ型和Ⅱ型。两类细胞生长速率和产多糖特性存在差异。Ⅰ型发菜细胞的生长速率较Ⅱ型缓慢,但其EPS产量较高,培养30d时,EPS产量为60.6mg/L。 通过离子交换层析和凝胶层析对三种不同来源的发菜多糖进行了初步纯化和对比。离子交换层析结果表明:EPS只含有一种酸性多糖(以0.2M NaCl洗脱);CPS可能含有两种酸性多糖,分别在0.25M NaCl和0.37M NaCl洗脱下来;而由野生发菜中提取的多糖由一种酸性多糖(以0.3M NaCl洗脱)构成。凝胶层析的洗脱曲线表明:EPS由一种多糖组成;CPS含有两种分子量大小不同的多糖组分;由野生发菜提取的多糖分离只得到了一个单一的对称峰。 确定了发菜细胞EPS和CPS的提取工艺。发菜细胞培养液或细胞浸提液经过离心、上清液浓缩、除小分子杂质、除蛋白、有机溶剂沉淀等,最后冷冻干燥得多糖,同时对提取工艺进行了优化。 以发菜细胞培养液及提取得到的发菜多糖为原料,开发研制了人造发菜和发菜苦瓜粉两种产品。