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目的转运RNA(transfer RNA,t RNA)是一类具有携带转运氨基酸能力的小分子核糖核酸,能促进信使RNA(m RNA)翻译成蛋白质。近期有研究表明,t RNA来源的非编码小RNA(t RNA-derived small RNA,ts RNA)在大小、核苷酸组成、生物发生和功能上均显示出显著的异质性。ts RNA可分为两大类:ti RNA(t RNA半分子)和t RF(t RNA相关衍生片段)。近年来,越来越多的研究表明,ts RNAs在多种癌症的发生发展过程中发挥着重要作用。在本研究中,我们检测了乳腺癌组织样本中ts RNAs的表达水平,并探讨其作为乳腺癌诊断新型生物标志物的临床应用前景,从而为进一步探索ts RNAs对乳腺癌发生发展调控作用提供了前期实验基础。方法我们首先提取乳腺癌患者肿瘤组织/癌旁组织(n=6)中总RNA,逆转录之后,通过PCR扩增得到量化的待测序ts RNA文库。随后,我们使用Illumina系统进行测序,得到的结果与Gt RNAdb数据库和MINTbase数据库进行比对,删除重复、不匹配和不完全的序列,从而得到了差异表达显著的ts RNAs。随后我们利用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)对乳腺癌患者肿瘤组织/癌旁组织(n=16)中表达差异显著的6个ts RNAs进行表达验证,并分析了ts RNAs的表达与临床病理特征的关系。最后我们利用Gene Ontology生物学途径分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes富集分析对表达差异显著的ts RNAs进行联合分析,并进行了靶基因的预测。结果测序结果显示:与癌旁组织相比,乳腺癌患者肿瘤组织中有29个ts RNAs表达呈现显著差异,其中16个ts RNAs表达上调,13个ts RNAs表达下调。实时定量PCR结果表明与癌旁组织相比,t RF-32-Q99P9P9NH57SJ(FC=-2.6476,p=0.0189)、t RF-17-79MP9PP(FC=-4.8984,p=0.0276)、t RF-32-XSXMSL73VL4YK(FC=6.5781,p=0.0226)在乳腺癌患者肿瘤组织中存在显著差异,其中t RF-32-XSXMSL73VL4YK表达明显上调(p<0.001),t RF-32-Q99P9P9NH57SJ和t RF-17-79MP9PP表达明显下调(p<0.001)。此外,本研究发现t RF-32-Q99P9P9NH57SJ与乳腺癌肿瘤分期和淋巴结转移中存在紧密联系(p<0.05)。通过GO与KEGG联合分析,我们发现t RF-32-Q99P9P9NH57SJ在脂肪细胞脂解的调控通路、t RF-17-79MP9PP在AMPK信号通路、t RF-32-XSXMSL73VL4YK在药物代谢通路中发挥重要作用,FZD3、PIK3CB、PRKCA和PTCH1可能是t RF-32-Q99P9P9NH57SJ的靶基因。结论本研究表明,与癌旁组织相比,t RF-32-Q99P9P9NH57SJ、,t RF-17-79MP9PP、t RF-32-XSXMSL73VL4YK在乳腺癌组织中的表达存在显著差异,这提示它们在乳腺癌诊断中的潜在应用价值,并为后续机制研究奠定了理论基础。