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目的:研究干扰BMP-4基因表达后对大鼠垂体瘤GH3细胞增殖和泌乳素分泌能力的影响,观察腺病毒对GH3细胞感染的敏感性,为基因治疗在控制人垂体腺瘤细胞生长及激素分泌的应用上提供实验基础和理论依据。 方法:(1)设计并构建表达特异性BMP-4 shRNA的重组腺病毒载体。(2)用构建的靶向BMP4的shRNA并携带有EGFP基因的重组腺病毒(rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA)感染GH3细胞,应用RT-PCR和Western Blot方法检测BMP-4基因的干扰效果。(3) Western Blot检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3细胞后EGFR蛋白的变化。(4) MTS检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3细胞后对细胞增殖的影响。(5) ELISA检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3细胞后对细胞PRL分泌的影响。 结果:(1)成功设计并构建携带靶向BMP4的shRNA的重组腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA,并成功转染包装细胞,得到高滴度的重组腺病毒。(2)重组腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA感染GH3细胞后,BMP4-mRNA和蛋白都受到明显抑制。(3) BMP4被干扰后,EGFR蛋白的表达也下调了。(4) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3细胞后,MTS检测提示较对照组OD值随时间升高幅度下降。(5) ELISA检测发现rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3细胞后较对照组可减少细胞PRL分泌。 结论:重组腺病毒对GH3细胞易感。携带多个靶向同一基因的shRNA也可以较好地发挥RNAi作用。沉默BMP-4基因后可降低GH3细胞对PRL的分泌,下调GH3细胞的增殖性。BMP-4可作为垂体泌乳素瘤基因治疗的靶点。