【摘 要】
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目的构建表达白细胞介素-18的条件增殖腺病毒ZD-IL-18并研究其介导IL-18对恶性黑色素瘤A375细胞的抗肿瘤活性。方法以质粒pJW-IL-18为模板,PCR扩增获得编码成熟IL-18的基因序
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目的构建表达白细胞介素-18的条件增殖腺病毒ZD-IL-18并研究其介导IL-18对恶性黑色素瘤A375细胞的抗肿瘤活性。方法以质粒pJW-IL-18为模板,PCR扩增获得编码成熟IL-18的基因序列。将IL-18基因克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-IL-18。用限制性内切酶BglⅡ从pCA13-IL-18酶切出包含CMV启动子及IL-18基因的表达框,并克隆至条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-IL-18。将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,9~12天后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,经PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-IL-18。重组腺病毒大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测定病毒滴度。ZD55-IL-18转染人恶性黑色素瘤A375细胞,通过MTT法检测肿瘤细胞的增殖抑制及结晶紫染色法分析细胞病变作用,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-18 mRNA的表达及免疫印迹法(Western Blotting)分析E1A与IL-18的表达。结果成功构建了表达IL-18的条件增殖腺病毒ZD55-IL-18;经PCR鉴定表明ZD55-IL-18包含目的基因;ZD55-IL-18的滴度可达1×1011PFU/ml;Western Blotting的结果显示ZD55-IL-18在A375肿瘤细胞中表达E1A与IL-18;ZD55-IL-18抑制恶性黑色素瘤细胞株A375生长的作用显著优于Ad-IL-18。结论条件增殖腺病毒ZD55-IL-18在恶性黑色素瘤细胞株A375中选择性增殖并高效表达IL-18,从而抑制肿瘤细胞A375的生长。该研究为进一步探索条件增殖腺病毒介导IL-18靶向治疗肿瘤提供了实验研究依据。
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