论文部分内容阅读
目的:本研究通过随机对照试验评价不同选穴法的针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）临床疗效的差异,同时采用ELISA法检测患者血清中脑肠肽的含量结合脑功能涨落分析（ET）记录脑内神经递质水平的变化,探讨不同选穴法的针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）的生理及神经效应差异,以期为临床中针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）找到最佳选穴方案;通过动物实验电镜观测大鼠海马形态学的变化,采用ELISA法结合Western blot技术及RT-PCR法,检测大鼠下丘脑内5-HT的含量,5-HT1A蛋白、5-HT2A蛋白表达,5-HT1AmRNA、5-HT2AmRNA相对表达量,探讨不同选穴法的针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）中枢效应机制,为临床中治疗原发性失眠（脾胃不和型）最佳选穴方案提供客观依据。方法:临床试验:以原发性失眠（脾胃不和型）患者为研究对象,将96例原发性失眠患者,随机分为对症结合辨证选穴组,对症选穴组,辨证选穴组,每组患者给予针刺治疗,疗程为4周,临床疗效采用匹兹堡睡眠指数量表（PSQI）、中医证候学量表、胃肠道症状评分量表（GSRS）及临床有效率;通过ELISA法记录治疗前及治疗后患者血清中脑肠肽（5-HT、VIP、SS、GAS、MTL等5项）的含量变化;通过脑功能涨落分析（ET）记录针刺治疗前及治疗后患者脑内的神经递质（5-HT、GABA、Glu、ACh、NE、DA等6项）分泌水平的变化。动物实验:采用碘乙酰胺灌胃法结合腹腔注射氯苯丙氨酸（PCPA）法复制脾胃不和型失眠大鼠模型,将大鼠随机分为空白组、模型组、对症结合辨证选穴组、对症选穴组、辨证选穴组,观察大鼠一般状态,记录大鼠体重变化,睡眠潜伏期（SL）及睡眠持续时间（ST）;通过电镜观察大鼠海马形态的差异,通过ELISA法、Western blot技术及RT-PCR方法检测各组大鼠下丘脑内5-HT的含量,5-HT1A蛋白、5-HT2A蛋白、5-HT1AmRNA、5-HT2AmRNA的相对表达量。结果:临床试验:1、通过PSQI、中医证候量表、GSRS的降分值对比发现,与对症选穴组及辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组PSQI、中医证候量表、GSRS的降分值有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。2、对症结合辨证选穴组临床有效率为87.50%,对症选穴组临床有效率为75.00%,辨证选穴组临床有效率为68.75%。3、ELISA法检测治疗前及治疗后患者血清中脑肠肽含量对比发现:与对症选穴组比较,对症结合辨证选穴组5-HT、Gas、MTL含量变化有差异,具有统计学意义（P＜0.05）;与辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组5-HT、VIP、SS含量变化有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。4、ET记录治疗前及治疗后患者脑内神经递质分泌水平对比发现:与对症选穴组比较,对症结合辨证选穴组Ach、5-HT、DA水平变化有差异,具有统计学意义（P＜0.05）;与辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组5-HT、DA水平变化有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。动物实验:1.行为学观察:与对症选穴及辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组大鼠体重增加,睡眠时间延长,睡眠潜伏期缩短,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.HE海马染色:与模型组比较,对症结合辨证选穴、对症选穴、辨证选穴组海马神经元排列相对整齐,细胞体积相对均匀,细胞轮廓相对清晰。3.电镜观察:与模型组比较,对症结合辨证选穴、对症选穴、辨证选穴组海马神经元线粒体结构相对整齐,染色质分布相对均匀,异染色质少量聚集。4.下丘脑ELISA检测显示:与对症选穴及辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组大鼠下丘脑内5-HT含量有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。5.WB检测显示:与对症选穴及辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组大鼠下丘脑内5-HT1A、5-HT2A蛋白相对表达量有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。6.RT-PCR检测显示:与对症选穴及辨证选穴组比较,对症结合辨证选穴组大鼠下丘脑内5-HT1AmRNA、5-HT2AmRNA相对表达量有差异,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.对症结合辨证选穴法在改善睡眠质量、改善胃肠功能症状、临床有效率,升高血清中脑肠肽5-HT、Gas、MTL、VIP的含量,降低SS的含量,对脑内神经递质5-HT、Ach、DA的水平调节作用优于对症选穴及辨证选穴法。2.基于三种选穴法的临床有效率、生理及神经效应的差异,临床中针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）最佳选穴方案是对症结合辨证选穴法。3.对症结合辨证选穴法在缩短失眠大鼠模型的睡眠潜伏期、延长睡眠时间、体重增加量,改善海马组织及超微结构,增加下丘脑5-HT含量,激活5-HT1A蛋白、抑制5-HT2A蛋白表达水平,激活5-HT1AmRNA、抑制5-HT2AmRNA的相对表达量等方面优于对症选穴及辨证选穴法。4.三种选穴法的针刺治疗原发性失眠（脾胃不和型）中枢效应的机制是增加失眠模型大鼠5-HT含量,激活5-HT1A蛋白、抑制5-HT2A蛋白表达水平,激活5-HT1AmRNA、抑制5-HT2AmRNA的相对表达量。