论文部分内容阅读
目的:探讨原代骨髓间充质干细胞在体外分化为软骨细胞的条件。骨髓中提取原代骨髓间充质干细胞,体外利用BMP-7、PDGF-B诱导具有多分化潜能的骨髓间充质干细胞定向向软骨细胞分化,比较BMP-7、PDGF-B及联合时对其诱导分化的促进作用。 方法:(1)无菌条件下收集健康、年轻患者因外伤截肢术后废弃骨骼中骨髓,4℃冷藏备用。(2)离心管内使用配制密度为1.073g/ml的Percoll分离液与稀释的骨髓分层放置,在1800g条件下低温离心机离心30分钟;吸取白雾细胞层与D-Hanks液混合并稀释三倍后1000g条件下低温离心10分钟,重复两次。(3)离心重悬细胞并取细胞进行计数,按比例接种细胞,用含15％FBS的LG-DMEM培养基在CO2培养箱培养扩增原代细胞,并行细胞形态学鉴定及流式检测细胞表面抗原。(4)MTT检测细胞增殖率,确定细胞因子使用浓度,进行实验分组。(5)诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,进行细胞进行甲苯胺蓝染色、Western blot及RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白含量及mRNA表达量,并予以统计分析。 结果:(1)成功获得原代骨髓间充质干细胞并进行培养扩增;(2)行光镜观察细胞形态学鉴定及流式细胞术检测细胞表面抗原,符合间充质干细胞的特点;(3)不同浓度下MTT检测间充质干细胞的增殖效率,以BMP-7200ng/ml及PDGF-B75ng/ml浓度时细胞增殖活跃程度最明显;(4)在BMP-7、PDGF-B的参与下,骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向分化;PDGF-B对分化过程的促进作用大于BMP-7对诱导过程的作用;PDGF-B与BMP-7联合组对成软骨细胞分化过程的促进作用大于单用其中一种因子,可提高低剂量TGF-β的诱导效率。 结论:成功提取BMSCs,进行成软骨诱导分化。PDGF-B与BMP-7在含低剂量TGF-β培养基诱导成软骨细胞的过程中具有促进诱导分化的作用;二者联合使用后诱导效率明显高于单用组,高于单用TGF-β组,为体外诱导分化软骨细胞提供了新的思路。