论文部分内容阅读
第一部分 人骨髓基质细胞的体外培养及其表型、组分分析 目的 体外培养和扩增人骨髓基质细胞,并探讨其表型及细胞组成。方法 体外静置贴壁培养和扩增人骨髓基质细胞,采用流式细胞仪检测培养五代的骨髓基质细胞表面抗原CD33、CD34、CD38、CDw90的表达情况和细胞DNA的含量。另外,通过免疫细胞化学染色技术检测了不同代次儿童骨髓基质细胞的波形纤维蛋白(Vimentin)、结蛋白(Desmin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth MuscleActin)和Ⅷ因子相关抗原(Von Willebrand Factor)的表达。结果 人骨髓基质细胞体外可培养传代至第九代。第五代基质细胞S期细胞含量仅占16.1%,说明其分裂增殖能力已下降;CD33、CD34表达极低,说明该培养方法所得的第五代细胞基本无造血细胞。另外,Vimentin在传代过程中的表达水平逐渐下降,Desmin、α-Smooth Muscle Actin单克隆抗体和Von Willebrand Factor抗体染色呈阴性。结论 本文中的骨髓基质细胞来源于间充质细胞,并不含血管内皮细胞;骨髓基质细胞的组成和表型与体外培养条件有关。 第二部分 不同发育阶段的人骨髓基质细胞对多种病毒的敏感性 探讨不同发育阶段的人骨髓基质细胞对多种病毒的敏感性。方法 采用静置贴壁培养法,体外长期培养了胎儿、儿童和成人骨髓基质细胞,并将传至5代以上的骨髓基质细胞采用微量细胞病变(CPE)法,开展了对5种病毒的敏感性试验。结果 人骨髓基质细胞对滤泡性口腔炎病毒(VSV),脊髓灰质炎病毒(Poliov)、Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSVⅠ、Ⅱ)均敏感,能产生明显的CPE,其效价(TCID50)可达10-3—10-4,其中胎儿骨髓基质细胞对病毒敏感性至少比儿童高2倍,比成人高4倍,即胎儿>儿童>成人,但对B3型柯萨奇病毒均不敏感。结论 人骨髓基质细胞对VSV、Poliov、HSV-Ⅰ和