目的 类风湿性关节炎(RA)是一种慢性、系统性疾病，以对称性多关节炎，最终导致进行性关节破坏为特征。RA的基本组织学变化是关节炎症、滑膜增生、滑膜纤维侵入到邻近的软骨和骨中。虽然RA的病原学还不清楚，但大量资料表明T淋巴细胞、巨噬细胞和增生的滑膜细胞很可能在这种疾病的发病机制中起主要作用，特别是这些细胞产生的细胞因子在RA的发病中参与极其重要的作用。目前用于RA治疗的药物很多，但有许多药物疗效不确定或不理想，而且副作用比较大，均未取得理想结果。而MTX因其起效快、副作用轻，服用方便等原因，在国内外已被用于RA治疗，并取得了一定的疗效。然而，关于MTX治疗RA的基础研究报导甚少。虽然认为B细胞、T细胞和巨噬细胞活性的抑制是MTX作用的重要机制，但它的作用机制还没有完全清楚，尤其是MTX对鼠和人体中细胞因子产生的作用还不确定。目前国外仅有少数研究分析了MTX对鼠和人体中细胞因子产生的作用。这些研究表明用MTX治疗可以降低关节炎模型中滑膜液中TNF和IL-1浓度，而对血清中TNF、IL-1和抗炎症细胞因子IL-4、IL-10的调控作用还不清楚。这个研究中，我们拟在建立佐剂型关节炎(AA)动物模型基础上，观察MTX对促炎症细胞因子如IL-1、TNF-α和抗炎症细胞因子IL-4、IL-10的调控作用，探讨MTX治疗RA的免疫学机制，为临床MTX治疗RA提供理论依据。 浙江大学硕士学位论文 方法 在0天，在SD大鼠的尾根部和大腿部皮内分别注射弗氏完全佐剂（CFA） 0．05ml，进行AA动物模型的诱导。其中一组大鼠作为预防组，从AA诱导的同 一天开始N天人肌肉注射 MTX每周一次，剂量为 0．75mg／kg／周，溶解在 0l 的生理盐水中，持续四周。待AA诱导出后，分成三组，一组为对照组，一组 为 MTX肌肉注射组，每周肌肉注射一次，剂量为 0．75mg／kg／周。另一组为 MTX 外用治疗组，每周外用一次，治疗皆持续四周。通过关节炎指数，血清中细胞 因于测定和关节切片的病理学检查评价疗效。实验数据经 SPSS 7刀FOR WIN软 件处理，统计数据用X士S表示，并用ANOVA和XZ检验分析。 结果 】、关节炎指数和发病率的变化 在 CFA注射后 14天，MTX预防组 7只 SD大鼠中有 6只发病，发病率为 85％。关节炎指数为二．8士0．74。对照组，共 10只大鼠，其中 9只大鼠发病，发 病率为90％。关节炎指数为3．4士0．90。两组的发病率和关节炎指数均无显著差 异（P＞0．05）。 关节炎大鼠经MTX肌肉注射治疗或外用治疗后，关节炎指数发生较显著的 变化，肌肉注射组关节炎指数为 1刀士 0．63，外用组关节炎指数为 1．4士 0．49，与 对照组相比有显著性差异（卜＜0．05）。而肌注组与外用组在关节炎指数没有明显 差异（P＞0．05） 2、细胞因于含量变化 用酶标法分别测定了MTX预防组、MTX肌肉注射组、MTX外用组和对照 组血清中 TNF－Q、IL。10、IL－lp、IL－4的水平，结果显示，MTX预防组、 MTX肌肉注射组、MTX外用组与对照组相比，TNF－口水平降低而 IL－10水平 升高，有显著性差异，P＜0．05。而IL－16、IL－4的水平各组之间没有明显差异， P＞0刀5。 2 浙江大学硕士学位论文 3、病理组织学变化 MTX预防组和对照组均可见滑膜及皮下组织血管扩张、充血、水肿，滑膜 表层的细胞增生、肥大，以对照组较明显，间质可见大量巨噬细胞、淋巴细胞、 浆细胞及少量中性粒细胞浸润，还可见脓肿形成。MTX肌肉注射组和外用药组 有轻微的滑膜及皮下组织血管扩张、充血、水肿，滑膜表层的细胞增生、肥大， 间质可见少量巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞及少量中性粒细胞浸润，未见脓肿 形成，炎症程度：对照组＞＊＊x预防组＞＊＊X肌肉注射组＞＊＊X外用组。 结论 1、MTX治疗（肌肉注射和外用）可以降低AA大鼠血清中TNF Q浓度， 提高IL－10的浓度，从而抑制或控制RA的发生发展。但MTX治疗对IL－l和IL－4 没有明显作用。 2、MTX治疗（肌肉注射和外用）可以降低AA大鼠的关节炎指数，降低关 节滑膜中巨噬细胞等单个核细胞的浸润，减轻炎症反应等病理反应。