Brd4是溴结构域BET蛋白家族中的一员,含有两个N端溴结构域,可以特异性结合乙酰化的组蛋白,作为支架结构募集转录因子、染色质重塑因子、去甲基化酶等调控基因转录,Brd4还参与细胞周期的调控及超级增强子的形成等。此外,Brd4最重要的功能是与正性转录延伸因子P-TEFb形成Brd4/P-TEFb复合物,调控基因的转录延伸。正性转录延伸因子P-TEFb由催化亚基CDK9和调节亚基CyclinT组成,是一个具有激酶活性的异源二聚体,P-TEFb可以通过其磷酸化功能解除转录暂停,起到转录延伸暂停释放(pausing release)作用,从而使转录过程顺利完成,调控细胞内约70%的基因转录,是全局性的转录延伸因子。本实验室前期初探及相关文献报道,Brd4蛋白在脂肪细胞分化中有一定的影响,但是具体机制还不太清楚。3T3-L1前脂肪细胞是体外分化常用的经典模型,可以用来研究脂肪细胞的分化如:细胞形态变化、脂滴形成情况、分化相关基因及转录因子的表达等,探索出脂肪细胞分化原理,从而治疗脂肪细胞过度分化引起的肥胖,肥胖性疾病等。脂肪细胞分化本质是基因的选择性表达,由基因转录与表观遗传共同完成。目前研究3T3-L1细胞分化主要集中在表观遗传调控层面,而本文以基因转录延伸过程中的转录暂停释放pausing release作为切入点,对脂肪细胞分化进行初步探索。我们使用经典分化模型3T3-L1细胞,采用“鸡尾酒”法诱导其分化,探索两种转录延伸因子Brd4及P-TEFb对3T3-L1细胞分化的影响。本研究通过基因敲除,药物处理、油红染色、qRT-PCR、免疫共沉淀等技术和方法,发现:(1)转录因子Brd4促进3T3-L1细胞分化;(2)正性转录延伸因子P-TEFb促进3T3-L1细胞分化;(3)Brd4通过募集P-TEFb影响3T3-L1细胞分化,上述研究结果从pausing release层面揭示了 Brd4及P-TEFb两种转录延伸因子对脂肪细胞分化的影响,初步建立了转录延伸暂停释放在分化过程中的生物学意义,为今后研发药物治疗肥胖及肥胖相关疾病提供更多理论基础。