弓形虫属原生动物门、孢子虫纲、弓形虫属,是一种细胞内寄生机会致病原虫,能感染所有的几乎温血动物,包括人类、鸟类、家畜、哺乳类,引起人兽共患疾病。弓形虫病极大威胁着人类的身体健康,尤其是孕妇和免疫力低下的人。孕妇和孕畜在孕期,感染弓形虫会发生流产或产死胎。对HIV、器官移植、癌症病人来说,弓形虫感染是引起死亡的重要因素。弓形虫病爆发也能带来畜牧业的重大经济损失。弓形虫病感染的严重后果,迫使我们重视研究弓形虫病的诊断方法。传统的诊断方法各有不同的弊端,单克隆抗体特异性强且在弓形虫方面已有应用。本实验选择弓形虫棒状体蛋白ROP4作为研究对象,构建了原核表达载体pET32a-ROP4,优化诱导表达条件,进行了蛋白纯化与复性。将纯化后蛋白作为抗原免疫小鼠,制备单克隆抗体。成功筛选出特异性强的2株单克隆抗体G-2和3B-7,并进行了鉴定。另外利用本实验室保存的ROP5表达菌液,重新表达蛋白纯化后免疫动物,制备了2株针对弓形虫棒状体蛋白ROP5的特异性单克隆抗体2B-7和2B-2。4株单克隆抗体经鉴定分属于3种不同类型,ROP4株单抗G-2和3B-7均属于IgG1轻链为λ,ROP5株单抗2B-7被鉴定为IgG2a,ROP5株单抗2B-2是Ig G1,轻链为κ。4株杂交瘤细胞注入小鼠腹腔产生了大量腹水,腹水经纯化后,SDS-PAGE分析均能看到重链和轻链。4个单克隆抗体均能识别对应的蛋白,也都能识别弓形虫虫体,且分泌抗体稳定,特异性强无交叉性。