目的:心肌缺血再灌注(I/R)损伤时过度自噬促发凋亡,前凋亡蛋白Bim是自噬与凋亡对话的交点。本团队新近发现心肌细胞缺氧时凋亡增加伴随Bim表达升高。我们推测:心肌I/R损伤时发生过度自噬,通过上调Bim表达而促发凋亡。本实验通过自噬抑制剂干预,观察心肌I/R损伤时过度自噬促发凋亡的作用,探讨Bim与自噬和凋亡的关系。研究结果有望揭示心肌I/R损伤时Bim介导自噬与凋亡对话机制,为防治心肌I/R损伤提供新思路。方法:培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧复氧(H/R)模型,在复氧时加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤10mM(3-MA)、氯喹20μM(CQ)干预。实验分为四组:正常组(control)、H/R组、H/R+3-MA组、H/R+CQ组,探讨Bim与凋亡和自噬的关系。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测心肌细胞存活率,分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测Bim、LC3、Beclin1 mRNA表达水平;Weston-blot检测凋亡相关蛋白Bim、active caspase-3、CytC及自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达。结果:缺氧复氧组与正常组对比,LDH及凋亡率升高,细胞成活率下降;Bim、LC3、Beclin1 mRNA表达量升高(p<0.01);缺氧复氧组Bim、active caspase3、CytC、LC3、Beclin蛋白表达量升高。而加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤、氯喹处理后与缺氧复氧组相比,加药组LDH及凋亡率也下降,细胞成活率增加(p<0.01);Bim、Beclin1 mRNA表达量下降;Bim、active caspase3、CytC、Beclin1蛋白表达量下降。H/R+3-MA组、H/R+CQ组与缺氧复氧组对比,H/R+3-MA组LC3mRNA及蛋白表达量下降(p<0.01),而CQ组LC3蛋白及mRNA表达量升高(p<0.01)。结论:Bim参与缺氧复氧对心肌细胞的损伤,通过抑制过度自噬,Bim表达下调,减少细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。再灌注导致过度自噬,过度自噬引起细胞凋亡增加,Bim表达上调。Bim可能是凋亡与自噬相互联系的桥梁。