论文部分内容阅读
PAN-1是一个结构相对简单的蛋白,除了主要的LRR结构域(leucine-rich repeat domain)之外,主要还有一个跨膜结构域。LRR结构域决定了PAN-1的功能,而跨膜结构域决定了PAN-1的定位。为了探究PAN-1的亚细胞定位,我通过DLG-1::RFP来标记seam cell与表皮的连接处,间接的标记seam cell细胞膜。通过共聚焦显微镜发现,PAN-1与DLG-1并不完全共定位,而是存在于seam cell的细胞膜上,并且在seam cell膜上的分布受细胞极性的影响。MYRF-1作为重要的转录因子,参与秀丽隐杆线虫的发育调控,与PAN-1一样定位于细胞膜上。先前实验我们发现PAN-1能够协助MYRF-1行使自身功能。为了进一步了解PAN-1是如何协助MYRF-1行使功能的,我通过构建不同的截短突变体,共转染至HEK293-T细胞,后续免疫共沉淀发现PAN-1的LRR结构域与MYRF-1的C2结构域之间存在着互作。同时当MYRF-1缺失跨膜结构域后即使存在C2结构域也无法与PAN-1互作,这说明两者的互作是在两个蛋白正确的定位于细胞膜上的基础上而存在的。pan-1突变体存在着早期发育停滞的表型,这制约了我们对于PAN-1在线虫发育后期乃至成虫中的功能的研究,为了初步了解PAN-1的功能,我通过CRISPCas9技术构建了一系列的在特定组织特异性敲低PAN-1的线虫品系。在对于DD中特异性敲低PAN-1,发现PAN-1能够调控D型运动神经元的突触重塑。而在肠道以及表皮特异性的敲低PAN-1,发现两个线虫品系有着相同的双层表皮的表型,推测在这两个组织之间存在着某种联系,共同协调线虫的正常蜕皮,并且这种机制还与组织中的PAN-1蛋白有关。本文对于PAN-1对不同组织的影响进行了初步的研究,也发现了一些有趣的现象,为后续深入研究PAN-1对于各个组织发育的影响及其机制的研究提供了一定的基础。