研究背景 增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreo retinopathy，PVR）可被看成一种特殊的创伤愈合过程。视网膜色素上皮细胞（retinal pigmentepithelium，RPE）分泌的细胞因子在细胞移行、增殖、分泌胶原和PVR膜形成等过程起重要的作用。临床研究发现IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症早期的几种细胞因子在PVR发生的各个时期均有不同程度的高表达，与PVR的发生明显相关。尽管现代玻璃体手术使视网膜脱离的复位率有很大提高，但术后视网膜表面和玻璃体腔中的细胞增殖常常导致手术失败。研究证实地塞米松和道诺霉素等药物可以降低PVR的发生率，可是其固有的缺点使它在临床应用上受到一定限制。因此，通过寻找安全、高效的药物以救治增生性玻璃体视网膜病变是眼科医生的任务。研究发现白介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）是IL-1的天然抑制剂，可与IL-1受体结合而不诱发细胞内信号传导，从而阻断IL-1的效应，增加体内IL-1Ra的含量可以抑制IL-1所介导的生物学效应。二者之间的一定比例对维持局部内环境稳定起重要作用。目的 本研究以RPE为实验材料，利用ELISA、免疫组化和原位杂交等方法观察IL-1Ra、IL-6反义核酸、地塞米松和道诺霉素等从不同方向对炎前因子（proinflammatory factor）的阻断效应，观察抑制剂的作用及其机理。材料与方法 1．体外实验：①在培养RPE细胞中加入IL-1α和LPS等刺激物，ELISA 第四军医人学博十学位论文 法检测RPE细胞培养上清IL－lp、IL－6、IL－8和T川’－u 等细Iki囚于分泌：分 别使用兔疫组化和原位杂交法观察细胞内几d、1卜6、1卜8和刁”M‘－U 蛋臼 质和 ml｛NA的表达。②观察几－II｛a等抑制剂对炎性因于介导的！wI表达炎汕细 胞因子蛋白质和 mRNA的影响。 2．体内实验 将W巳注入兔眼（48只眼）玻璃体腔建立1‘VIZ模型，同时注 入几－IRa等抑制剂，通过直接检眼镜、B型超声和组织学检查观察！’V！｛的形成， 计算各组卜VR的发生率。 结果 1．体外培养RPE在基础状态下产生少量的I！。－6、IL－8和’1’M’－。，－IZ要 存在于细胞内。在 LPS和 IL－IQ的刺激下，培养上消中和绷胞内 L－6、仕－8 和‘I’NF－Q的含量于培养后的 Zh—4h明显增加，于6h一sh达，E叩￥。sh－比11以后 培养上清和细胞内炎前因子的表达趋于平稳。l［。－Ic与uS联合刺激刁“以＊显 增加 TNI’－Q的表达，在联合刺激后 sh培养上清中＊。－6、I！．－H和”l”NI’－。分别达 到 3500、3000和 4510pg．ml’．10”cells。 2．兔疫组化法检测基础状态下细胞内炎前因于蛋白质表达儿乎不着色。 经过几－la或者LPS刺激sh后 RPE细胞内 IL－6、IL－8和‘I’NI’－u蛋白质的表达 呈现为胞浆中浓淡不一的棕黄色着色，IL－IQ联合计S作用后 I｛PE染色较深。 但是IL－lp不着色。 3．在炎症介质介导下，RPE细胞几干、ILE和 TNF－u ml｛NA表达表现为 胞浆中蓝色着色，而未经刺激的细胞则只有很少的细胞呈现淡蓝色。 4．ELISA显示在几－in介导下，IL－IRa组、地塞米松组＄［I道诺霉素组培 养11f＃I－I。IL－6、IL－8和”l”N！‘－口的剂量比对照组低，IL－6 ）R义核酸组」：j肖中 11。－6 的剂量比对照组低，联合用药组上清中几－6、IL－8和TrNF－Q 比其他各组均低， 方差分析显示各组之间具有显著性差异。 5．原位杂交结果表明几－IRa组和道诺霉素组 IL－6、11。－8和‘l’NI‘－。ml（N 的表达少，IL－6反义核酸组仅仅只有几－6mRNA染色比对照组淡，’ti h［。ISA— 致。地塞米松组 IL－6、IL－8和 TNI‘－a mRNA染色与对照组没有明显差异。 6．体内实验显示第4周末对照组100％的眼发生视网膜脱离，IL－II｛a组 有5只眼（62．5％）发生视网膜脱离，组织学检查可见牵拉性视网膜脱禹，脱离的 4 第四军医大学博十学位论文 视网膜下可见渗出液，未见细胞成分。玻璃体腔内增殖膜的形成，增殖膜与视 网膜相连，PVR膜细胞浆内无色素颗粒；地塞米松组有4只眼（50％）发生视网膜 脱离，在脱离的程度上均比对照组轻：道诺霉素组和IL－6反义核酸组分别有5 只（62．5％）和 6只眼（75％）发生视网膜脱离，而联合用药组则只有 2只眼（25％） 发生牵拉性视网膜脱离。联合用药组比所有其它组的视网膜玻璃体病变轻，视 网膜脱离的面积也较小。 结论 1在几＊ a或者 LPS的刺激下，体外培养的 RPE可以表达一定的］I』－6、l；．－8