目的：口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是发生于口腔黏膜的一种常见的慢性非感染性炎性免疫反应性疾病，该病顽固难治，反复迁延，世界卫生组织将其列为癌前状态。OLP致病机制复杂，尚无明确定论，近年来很多研究表明：细胞凋亡抑制是OLP的重要致病因素之一。值得关注的是核因子KB(nuclear factor kappaB，NF-kB)，它的表达、活化及易位已成为研究自身免疫相关性疾病、各类炎性疾患及肿瘤的新焦点，NF-k B能够抑制细胞的凋亡，它在OLP的发生、发展等方面具有重要调控作用，提示我们：抑制NF-k B活化的信号传导途径将成为OLP临床治疗的新靶点。目前，OLP的治疗尚无特异性药物，其药物研究受到诸多因素的影响，缺乏合适的药物评价模型是OLP药物研发的主要障碍。本实验从临床病例出发，建立体外稳定可重复的人口腔扁平苔藓角质形成细胞体外培养体系，探讨人口腔扁平苔藓角质形成细胞体外培养方法和生物学特性，并初步研究核因子k B在培养人OLP角质形成细胞中的表达和定位，为今后建立基于NF-k B信号通路药物筛选OLP体外细胞模型的实验奠定基础。 方法：选择临床及WHO标准病理确诊的口腔扁平苔藓患者黏膜活检标本，行OLP角质形成细胞的体外培养和生物学特性的研究。 1．细胞培养：采用冷酶消化法分离细胞，无血清培养基进行原代及传代培养，相差显微镜下观察和记录细胞形态变化。cck-8法测定细胞的生长曲线，研究此细胞体外生长的增殖情况。 2．细胞鉴定：间接免疫荧光法进行上皮细胞角蛋白的定性实验，并设立阴性对照、阳性对照及空白对照组。扫描电镜和透射电镜从超微结构层面进一步鉴定细胞特性。 3．核因子k B在培养人口腔扁平苔藓角质形成细胞中的表达和定位的初步测定：采用间接免疫荧光法，单克隆NF-k Bp65抗体对扁平苔藓角质形成细胞中活化的NF-kB进行标记，明确NF-k B的表达和定位。 结果： 1．Ⅰ型OLP(网状、斑块型)角质形成细胞可在无血清培养基中进行体外培养，可连续传5～6代，整个细胞生长期间为单一的角质形成细胞，细胞为多角形，长到一定密度呈现典型的铺路石状，符合上皮细胞生长形态特征。OLP角质形成细胞的生长曲线基本呈“S”型，传代周期约6～7d，一般7d左右能达90％以上融合。Ⅱ型OLP(萎缩、糜烂型)角质形成细胞活力欠佳，不易生长，其培养条件需要进一步摸索。 2．角蛋白间接免疫荧光反应阳性，即角蛋白阳性表达，阳性率达到90％以上，定位于胞浆，能够鉴定培养细胞为角质成细胞。扫描电镜显示：细胞周边微绒毛呈辐射状，长短不一；细胞中央凸起为胞核部位，表面呈现白色高密度区域，此区域为微绒毛丰富聚集，微绒毛是上皮细胞的特征性结构之一。透射电镜显示：细胞胞浆内可见大量的空泡性结构，部分空泡内有吞饮细胞器后的膜性结构，这一病理性变化与OLP组织的特征性超微结构变化相一致，能够进一步鉴定我们培养的细胞为OLP角质形成细胞。 3．OLP角质形成细胞中部分细胞NF-k Bp65阳性表达，定位于胞核，表明体外培养的OLP角质形成细胞存在NF-k Bp65的活化，阳性对照组OLP黏膜上皮基底层及棘细胞层NF-kBp65阳性表达，同时固有层浸润淋巴细胞亦见弥漫阳性表达，阴性对照组正常黏膜仅偶见基底层细胞及固有层淋巴细胞散在阳性表达。结果表明：体外培养的OLP角质形成细胞保持了OLP病损区的病理表现特点之一即NF-k B的活化。 结论：选择临床诊断和病理诊断一致的Ⅰ型OLP(网状、斑块型)标本，采取Dispase冷酶消化法获取细胞，无血清角化细胞培养基对OLP角质形成细胞进行原代和传代培养，可传5～6代。细胞形态学观察显示，细胞呈多角形，生长到一定密度呈现典型的铺路石状，符合上皮细胞生长形态特征。通过超微结构观察及角蛋白间接免疫荧光法等细胞定性研究表明，培养细胞具有OLP上皮细胞的典型特征。间接免疫荧光对核因子k B在口腔扁平苔藓角质形成细胞中的表达和定位的初步测定表明，此培养体系保持了扁平苔藓病损区的部分病理特性，能够代表此疾病的部分特征，当然，为了使OLP角质形成细胞更好的具有疾病模型的代表性，用OLP浸润区淋巴细胞或细胞因子等进行体外刺激，使NF-k B进一步活化，建立以此信号通路为基础的OLP药物筛选细胞模型的研究需进一步探索。