【摘 要】
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目的:建立人类精子头部和尾部蛋白质图谱,筛选针头畸形精子症特异性表达蛋白质.方法:采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向对全精子、精子头部、针
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目的:建立人类精子头部和尾部蛋白质图谱,筛选针头畸形精子症特异性表达蛋白质.方法:采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向对全精子、精子头部、针头号畸形精子蛋白质抽提物进行蛋白质双向电泳(2-DE)分离,经银染获得蛋白质电泳图像.其中精子蛋白质的2-DE比较了硫脲/尿素/盐酸胍法和Kit/盐酸胍法两种蛋白质提取方法.采用分析软件Image Master 2D Elite 3.0对2-DE图像分析,着重比较精子蛋白质头部图像与精子蛋白质图像、针头畸形精子蛋白质图像与精子蛋白质图像的蛋白质斑点组成差异.结果:(1)硫脲/尿素/盐酸胍法和Kit/盐酸胍法两种蛋白质提取方法所得2-DE图像中,硫脲/尿素/盐酸胍法得到的蛋白质斑点有802个,Kit/盐酸胍法得到2-DE图像中的蛋白质斑点797个,其中相同的有492个,将两种方法获得的图像整合而得到的全精子蛋白质质图像有1107个蛋白质斑点.(2)精子头部图像蛋白质斑点有428个,经过匹配,它们全部来源于全精子蛋白质图像.(3)针头畸形精子图像蛋白质斑点有424个,将之与全精子蛋白质图像比较,发现有102个蛋白质斑点在正常精子中无表达.结论:(1)102个在针头畸形精子中表达但是在精子蛋白质图像中缺如的点很可能是与精子畸形有关的点,为进一步研究针头号畸形精子畸形形成的机理提供了突破口.(2)成功分离出精子头部,并通过蛋白质双向电泳技术初步建立精子头部蛋白质图像,有428个蛋白质斑点,据此,确定了精子头部主要来源的蛋白质.(3)硫脲/尿素/盐酸胍法和Kit/盐酸胍法两种蛋白质提取方法互相补充,更完善精子蛋白质图像的建立,并为精子蛋白质图谱的完整建立奠定基础.
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