邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate, DBP)是酞酸酯类化合物(Phthalate Esters, PAEs)的一种,在现代工业生产和加工中应用面相当的广。其用途主要有增塑剂、胶黏剂、润滑剂等。DBP是通过非共价键的方式与其他化合物进行连接的,稳定性不高,会在加工和使用的过程中,慢慢释放到环境中,对人和环境具有潜在的危害。DBP主要是通过吸入、皮肤接触、食入等多种途径进入人体,有时候医学注射可以成为一种高危险度的暴露方式。摄入的DBP借助摄入与排泄动态平衡的方式在人体内长时间的累积。研究表明,DBP是一种内分泌干扰物,具有生殖毒性、发育毒性以及致癌等危害。现今,针对DBP的检测技术有许多种,但主流的方法还是气相色谱-质谱联用(Gas chromatography coupled mass spectrometry, GC-MS) 和高效液相色谱法(High performance liquid chromatography, HPLC)。但是,这两种方法操作难度大,检测费用高,对设备的要求也高,检测过程耗时,不能实现大量样品的同时检测。因此,建立更好的DBP检测技术,用以了解人体摄入的DBP在机体内的分布和累积情况是人类迫切需要解决的问题。本研究主要分为三个部分。第一部分研究是建立检测DBP的酶联免疫吸附分析技术(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。本研究成功制备出能稳定分泌DBP单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对其进行克隆化扩大培养,成功筛选出高效价和高亲和力的DBP单抗,建立了间接竞争ELISA的DBP检测技术。此技术操作方便,成本费用较低,同时本研究还对ELISA检测中的几种重要反应条件进行了优化筛选,并在最优条件下建立了间接竞争ELISA标准曲线：y=15.401Ln(X)-24.13,R2=0.9973。DBP浓度和抑制率之间呈现良好线性关系。第二部分研究是将所开发的DBP单克隆抗体ELISA检测方法用于生物样品的检测。本实验采用口腔灌胃和皮肤涂抹两种染毒方式,对大鼠进行DBP暴露,两种方式的DBP暴露浓度均为200mg/kg/D。连续暴露一周后,在24h、48h、72h时间间隔后,分别处死各组大鼠,利用ELISA检测技术,检测DBP在大鼠体内肝脏、肾脏、血液、尿液的含量。结果表明,经口腔灌胃染毒处理的大鼠体内DBP含量高于皮肤涂抹组,两种暴露方式之间,实验组与空白对照组之间皆存在极显著差别(p<0.01)。随着暴露后间隔时间的延长,大鼠体内各器官组中的DBP含量逐渐减少,在72h时间间隔后,DBP残留量只有微量,说明大鼠体内的DBP会随时问逐渐被代谢掉,并通过尿液排出体外。第三部分研究在ELISA检测技术的基础上,建立了免疫荧光检测技术。本研究采用皮肤涂抹的方式对大鼠进行暴露染毒,染毒浓度为200mg/kg,空白组用玉米油进行暴露染毒。对大鼠进行一周的DBP连续暴露,在暴露后的24h、48h、72h时间节点,处死各组大鼠,取大鼠肝脏、肾脏、胃、睾丸等器官,制作冰冻切片,然后利用免疫荧光技术,结合DBP单抗的制备,检测DBP在各器官的分布和累计情况。免疫荧光技术采用双标记,可以从视觉上展示DBP在机体内的分布和累积情况,结果显示DBP在皮下组织如汗腺和毛囊中出现累积情况,在肝和肾中的累积量较大,还发现DBP可以穿透大鼠的生物屏障进入睾丸中。在通过对大鼠暴露后的24h、48h、72h体内DBP的残留量检测,发现通过皮肤涂抹暴露后,大鼠体内的DBP会在2-3内迅速代谢并排出。