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第一部分：LAP+CD4+Treg细胞在结直肠癌患者外周血中的分布特征目的：检测LAP+CD+Treg细胞在结直肠癌患者外周血中分布比例,并观察其与肿瘤分期、病理类型之间的关系。方法：选取40名结直肠癌患者与20名健康体检志愿者作为研究对象。运用流式细胞技术对研究对象外周血LAP+CD+Treg细胞占CD4+T细胞的比例进行检测。分析研究对象的相关临床资料：性别、年龄、民族、术前癌胚抗原(Carcino-embryonic antigen,CEA)水平、肿瘤直径、肿瘤临床分期、肿瘤分化程度等,初步探讨结直肠癌患者外周血LAP+CD+Treg细胞比例分布与上述I临床资料间的关系。结果：40例结直肠癌患者外周血LAP+CD4+Tre g细胞占CD4+T细胞(9.35±2.87)%,高于20例健康对照组(1.52±0.69)%,t=12.275,P=0.000。有淋巴转移的肠癌患者LAP+CD4+Treg细胞占CD4+T细胞(11.41±2.02)%,明显高于无淋巴转移的肠癌患者(9.25±2.07)%,f=3.276,P=0.002。C、D期肠癌患者LAP+CD4+Treg细胞占CD4+T细胞(10.77±1.99)%,A、B期肠癌患者LAP+CD4+Treg细胞占CD4+T细胞(8.07±1.09)%,两者之间差异显著,t=-5.376,P=0.000。 LAP+CD4+Tre g细胞在不同的性别、年龄、民族、肿瘤大小以及肿瘤分化程度的分组中无差异(P>0.05)。根据Pearson相关分析显示：肠癌患者外周血LAP+CD4+Treg细胞的比例与血清CEA水平呈正相关,r=0.543,P=0.006。结论：结直肠癌患者外周血中LAP+CD+Treg细胞水平显著高于健康对照组,提示其可能参与了结直肠癌的发生发展过程,具有作为机体免疫状态指标参考的潜能。LAP+CD+Treg细胞水平在淋巴结转移与否及不同肿瘤分期中存在差异,但尚不能认为其与病情严重程度相关。第二部分结直肠癌患者外周血LAP+CD4+Treg细胞的体外研究目的：通过体外分选结直肠癌患者外周血中的LAP+CD4+Treg细胞和LAP-CD4+T细胞,检测并比较两者细胞因子谱的差异,初步探讨LAP+CD4+Treg细胞在结直肠癌发病机制中的作用；同时观察工L-8对LAP-CD4+T细胞体外诱导的影响。方法：收集2014年11月10日至2015年2月1日广西医科大学附属第一医院初次行手术治疗的32例结直肠癌患者的外周血,连续梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMCs),再用免疫磁珠分选技术(Magnetic Cell Sorting, MACS)分选出CD+T细胞中的LAP+CD4+Treg细胞和LAP-CD4+T细胞,流式细胞术检测分选后获得的细胞纯度；台盼蓝掺入法检测分离前后细胞活性,应用液相芯片、酶联免疫法(Enzyme-LinkedImmunoSorbent, ELISA)检测两种细胞培养上清液所含相关细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、IFN-β的浓度。同时,将一定浓度IL-8添加到LAP-CD4+T细胞中培养72h,采用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)检测相应LAP-CD4+T细胞培养孔中诱导获得的LAP+CD4+Treg细胞的比例。结果：应用磁珠免疫法分选获得的LAP+CD4+Treg细胞纯度为(95.14±1.67)%, LAP-CD4+T细胞纯度为(95.32±2.41)%；台盼蓝掺入法结果显示LAP+CD4+Treg细胞存活率为(92.54±2.31)%,LAP-CD4+T细胞存活率为(93.14±2.35)%；液相芯片以及ELISA检测结果表明LAP+CD4+Treg细胞较LAP-CD4+T细胞分泌更高浓度IL-10、TGF-β(110.65±12.45 vs.72.86±10.87, t=9.13, P=0.000; 107.03± 17.69 vs.64.19±14.15, t=7.76,P=0.000)。加入CD3、CD8抗体及IL-2可诱导活化的LAP-CD4+T细胞只产生部分LAP+CD4+Treg细胞(0.48±0.54)%,但在此基础上添加工L-8后可产生更多的LAP+CD4+Treg细胞(1.51±0.26)%；t=-6.379,P=0.000。结论：磁珠免疫法分选获得的LAP+CD4+Treg细胞方法经济可行,分选后细胞保持较高的活性,LAP+CD4+Treg细胞较LAP-CD4+T细胞分泌更高浓度的TGF-β和IL-10,可能通过分泌高浓度细胞免疫抑制因子IL-10、TGF-β参与机体肿瘤的免疫逃逸机制；同时,IL-8能够提高体外诱导活化的LAP-CD4+T细胞转化为LAP+CD4+Treg细胞的比例,这有可能成为未来免疫治疗策略的新靶点。