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第一部分:bFGF促进大鼠皮肤急性创面的愈合。
目的:观察大鼠皮肤急性损伤后,bFGF对急性创面愈合的影响。
方法:SD雌性大鼠50只,体重为250-300g,麻醉后,剃毛机剃除背部脊柱两侧的鼠毛,皮肤用碘伏和酒精消毒,严格按照外科的无菌操作技术,做面积为2cm×2cm的急性创面,每只大鼠做2个创面。将大鼠分为2组,对照组和bFGF组。术后每天量取创面的面积,并在3d,7d和14d处死大鼠,收取组织,部分组织样品常规脱水,石蜡包埋和切片。HE染色和Masson染色,以及免疫组化的方法观察和检测组织内部形态学,胶原蛋白的合成以及TGF-β1、PCNA和CD68的表达情况。
结果:1.bFGF通过调节炎症反应、TGF-β1蛋白表达、细胞的增殖和迁移,加速创面再上皮化,减少疤痕形成,提高创面愈合效果。2.bFGF调节ECM合成和降解,促使肉芽组织中胶原蛋白合成和沉积,促进创面的愈合。3.bFGF促进肌纤维母细胞的凋亡,抑制瘢痕的产生。
结论:bFGF通过调节相关蛋白的表达,促进大鼠急性创面的愈合。
第二部分:bFGF抑制兔耳增生性瘢痕的形成。
目的:增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是一个挑战性的难题,其病理学发病机制导致成纤维细胞过度产生和胶原蛋白过度的堆积。研究表明bFGF在创面修复过程中能够抑制瘢痕形成,但具体的机制并不是很清楚。本研究旨在证明bFGF是否可以减轻或消除形成增生性瘢痕的兔耳模型。
方法:日本长耳大白兔12只,不拘雌雄,体重为2.5-3.0 kg,兔耳健全,在动物实验中心适应性分笼饲养1周。耳缘静脉麻醉后,兔耳腹背侧面皮肤用碘伏和酒精消毒,严格按照外科的无菌操作技术,在兔耳腹侧长轴上,作直径为1cm大小的圆形创面,创面间隔1.0 cm以上,去掉兔耳全层皮肤及软骨膜,每只兔耳作6个相同大小的创面,术后创面暴露。创面制作后1天,动物无死亡,用随机数字表法把12只大白兔随机分为2组,对照组和bFGF组,连续给药7d。术后20d和40d取瘢痕标本,用HE染色,光镜下观察标本的组织学改变,测定表皮厚度指数(ETI)和瘢痕增生指数(SEI),Elisa法检测标本中的胶原蛋白的含量变化,采用免疫组化和免疫印迹法检测两个不同时间点标本中α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。
结果:1.bFGF能够降低兔耳增生性瘢痕组织中的ETI和SEI。2.bFGF能够减少瘢痕组织内胶原蛋白的含量。3.bFGF能够减少瘢痕组织内细胞的数量,并使得胶原蛋白排列疏松有序。4.bFGF能够下调瘢痕组织内的TGF-β1及α-SMA蛋白的表达。
结论:bFGF能够抑制兔耳增生性瘢痕的形成。
第三部分:bFGF对增生性瘢痕组织中成纤维细胞的影响。
目的:通过建立原代增生性瘢痕成纤维细胞模型,观察bFGF在体外抑制瘢痕形成。
方法:收集人体的增生性瘢痕组织,应用组织块法分离培养增生性瘢痕成纤维细胞进行实验。应用RT-PCR方法观察bFGF对于瘢痕形成相关mRNA在成纤维细胞中过表达,免疫印迹法检测bFGF对TGF-β/SMAD信号通路的影响。
结果:1.bFGF调控与增生性瘢痕成纤维细胞相关mRNA的表达,减少瘢痕形成。2.bFGF抑制TGF-β1/SMAD信号通路,减少瘢痕的形成。
结论:在原代增生性瘢痕模型中,bFGF能够抑制瘢痕的形成。