绵羊支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia,MP),是动物传染性疾病中影响较严重的疾病。近年来在新疆呈爆发性流行,给畜牧业带来了一定的损失。甘露聚糖结合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)是肝脏合成分泌到血液中抗感染的天然免疫分子,它在抗原抗体产生特异性反应之前,能激活诱导机体免疫反应,被看成是天然免疫系统的重要成员。有研究证实,MBL多态性与多种疾病有相关性,本实验室前期研究发现MBL基因多态性和绵羊支原体肺炎抗性间有一定的相关性。为了理清MBL的含量高低与绵羊支原体感染的关系以及MBL发挥免疫效果的机制。本研究从绵羊个体水平和细胞水平,探究MBL抗绵羊肺炎支原体感染的机制,实验如下:⑴血清中不同MBL浓度绵羊人工感染肺炎支原体后体内相关免疫因子变化规律研究:将血清中不同MBL浓度的绵羊分组,人工感染绵羊支原体(MO)后,检测并分析MBL与多种免疫因子表达的变化。结果发现,不同MBL浓度的绵羊人工感染后血清中MBL浓度呈下降趋势,随着人工感染时间的延长,发生免疫水平不同的变化,其中MBL浓度较高的绵羊组其促炎因子IL-2、IFN-γ浓度比较较高,抗炎因子IL-4在人工感染后一天呈逐渐升高,此后开始下降;MBL低浓度的绵羊组人工感染后TNF-α浓度显著升高,随炎症的舒缓,逐渐降低;人工感染后补体C1升高,其MBL浓度较低的绵羊组14d后升至最高,反映出该组绵羊病程更长,转归更慢;补体C3在人工感染后的表达先急剧升高再降低,MBL浓度较低的绵羊组下降比较缓慢。综合人工感染后各免疫因子的表达变化情况,可知较高浓度MBL可以增加绵羊对支原体肺炎的抗性。⑵绵羊气管黏膜上皮细胞原代培养改良与细胞鉴定:呼吸道黏膜上皮细胞是一种很难获得的细胞,作为向外开放的组织,很容易被许多种病原菌污染,培养难度较大,本研究以二型胶原酶加刮刷法消化气管黏膜提取绵羊气管黏膜上皮细胞,对细胞进行形态学观察,并用免疫组化法对细胞进行鉴定。⑶MBL对感染MO的体外培养绵羊粘膜上皮细胞的修复作用研究:先用PEG-6000从绵羊血清中粗提天然MBL,然后再利用Mannan-Aragarose亲和层析对粗提的MBL进行纯化,从而得到比较纯的目的蛋白,分别于原代培养绵羊气管黏膜上皮细胞接种MO前后,加入纯化的MBL蛋白,观察细胞生长状况并检测感染前后免疫因子的变化。研究发现绵羊气管黏膜上皮细胞感染支原体肺炎后ICAM-1基因和IL-6基因表达升高,MBL基因表达降低,各组之间相互比较无显著性差异。在细胞凋亡实验中各组中细胞的凋亡率也没有显著性差异。但在支原体对绵羊气管黏膜上皮细胞死亡率的影响实验中发现,感染前加入MBL蛋白的组明显比感染后加入MBL蛋白的组细胞存活率高。一定浓度的MBL对绵羊气管黏膜上皮细胞对抗MO的感染效果比人工感染后追加MBL效果好。其可能原因是MBL在MO与绵羊气管黏膜上皮细胞结合前起到保护作用,防止病原菌与细胞的结合;当MO与绵羊气管黏膜上皮细胞结合后追加的MBL却没有较好阻断二者的结合的效果。本实验从绵羊个体水平和细胞水平,揭示了甘露糖结合凝集素在绵羊抗支原体感染中所起到的作用,丰富了甘露糖结合凝集素的研究,对深入研究MO的致病机理以及MBL的免疫效果与应用提供了重要依据。