鸡Myoz3基因对骨骼肌卫星细胞增殖凋亡的影响及其转录调控机制探究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qinchuanhedian
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
Myoz3蛋白是钙调神经磷酸酶肌小结结合蛋白家族(Myozs)成员之一,也是肌肉Z线的重要组成蛋白,在维持骨骼肌结构和功能方面发挥着重要作用,但目前我们尚不清楚它对肌细胞增殖、凋亡的影响以及它的转录调控机制。因此,在本研究中,我们首先检测了鸡Myoz3基因的mRNA表达模式,并通过qPCR、CCK-8、EdU、流式细胞术等技术探究了Myoz3对鸡骨骼肌卫星细胞增殖、凋亡的影响。接着,我们采用PCR技术克隆获得鸡Myoz3基因5’转录调控区片段,利用生物信息学分析了Myoz3启动子的结构和功能,并通过定点突变、过表达、干扰、EMSA和ChIP技术研究了转录因子MyoD对鸡Myoz3基因的转录调控机制。本研究的主要结果如下:(1)Myoz3基因在胸肌中的mRNA表达水平显著高于腿肌。Myoz3在E15-D35期间的表达量存在差异,具体表现为:在E15-D6的表达量逐渐升高,在D2-D6期间达到最高峰,而在D27和D35的表达量急剧下降。在体外培养的卫星细胞中,Myoz3的表达量呈现出先升高后降低的趋势。(2)过表达/干扰鸡Myoz3基因后,骨骼肌卫星细胞中细胞周期相关基因PCNA、CDK2和cyclin D1的相对表达量都分别显著升高/降低(P<0.05)(3)CCK-8、EdU的结果表明,过表达和干扰Myoz3基因后,鸡卫星细胞的细胞活力和EdU阳性增殖细胞比例分别显著升高和降低(P<0.05);同时,我们通过流式细胞术检测发现,Myoz3表达量的上调使更多的卫星细胞处于G2期和S期,而Myoz3表达量的下调使更多的卫星细胞处于G1期。(4)干扰鸡Myoz3基因后,凋亡相关基因Bcl-2和Caspases3的表达量显著降低(P<0.05),而P53的表达量显著升高(P<0.05);过表达Myoz3基因后,凋亡相关基因的表达均没有发生显著变化(P>0.05)。流式细胞术结果表明Myoz3的过表达和干扰都没有使细胞凋亡数目发生显著改变。(5)双荧光素酶报告基因试验鉴定出Myoz3基因核心启动子位于-152/+240范围内,并预测到2个转录因子MyoD的结合位点(E-box)。定点突变试验结果表明MyoD结合位点的突变使启动子转录活性显著降低。过表达MyoD使启动子的转录活性显著增强。(6)过表达/干扰转录因子MyoD使卫星细胞中Myoz3的表达水平分别显著升高/降低(P<0.05);同时在不同生长发育阶段的胸肌中,Myoz3和MyoD的mRNA表达趋势是一致的;EMSA和ChIP分别在体外和体内证实鸡的转录因子MyoD通过MyoD的结合位点(CANNTG)与鸡Myoz3核心启动子序列发生结合。综上所述,鸡Myoz3基因的表达与鸡出生前后的肌肉生长发育密切相关,并正向调控骨骼肌卫星细胞的增殖,而转录因子MyoD通过启动鸡Myoz3基因的转录也参与到这一生物学过程中。
其他文献
近年来,基于可持续能源的研究蓬勃发展,开发低成本器件也成为科研工作者的一个研究热点。其中,关于太阳能资源的利用引起了广泛的关注。而染料敏化太阳能电池(DSSCs)以其成本低廉、无毒无污染和光学性能可调等优点,在太阳能器件中脱颖而出。染料敏化剂是DSSCs的一个重要组成部分,其主要由纯有机光敏染料和金属有机配合物染料两大类组成。纯有机光敏染料的经典结构是D-n-A结构,即供体-桥链-受体结构,这三部
风电齿轮箱轴承长期工作在变速变载的恶劣工况下,其运行状态直接影响着风电机组的正常服役。同时,由于风电齿轮箱轴承等关键部件加工复杂、采购周期长,风场通常需要提前采购并预备备件以确保正常持续的生产。因此,全面准确地评估风电齿轮箱轴承的健康状况,可以为制定合理有效的备件制作计划和检修计划提供可靠的依据,在保证机组安全可靠的前提下,能够最大限度地发挥轴承的作用,降低风场维护成本。风电齿轮箱轴承的健康评估主
在校园环境中,现代教育理论与技术的不断发展与创新,使得“以学生为中心”的思想越来越流行,以学生为主导的各种教学形式大量涌现。协作学习便是以学生为主导的重要的校园学习方式。传统协作学习多发生于学习者在同一时间、同一空间进行的学习活动。随着当今互联网技术的不断发展和市场的需求,计算机支持的协作学习(CSCL)发展非常迅速,成为了当下协作学习的主要表现形式。如中国大学MOOC、网易云课堂、腾讯课堂等均为
随着社会人口的不断增长和生活环境的不断变化,医疗资源的需求不断扩大。由于能够为临床提供明确的病理诊断,病理科检验的需求增长尤为明显。近年来,人工智能与智慧医学成为医学界乃至全社会热议的话题,数字病理成为病理科检验的发展趋势。实现智能化病理诊断不仅能辅助医师提高诊断的准确度,也可以大大减轻医师的工作负荷,从而提升检验效率。因此,实现科学可靠的智能化病理检验成为数字病理的重中之重。本文针对这一热点难题
随着高温超导技术的发展,第二代高温超导带材YBCO凭借其高载流能力、高临界温度等优越性在超导电力设备的应用中愈加广泛。但由于高温超导带材尚不成熟的制备工艺与其极低温下的电-磁-热运行工况,超导带材在线圈绕制、短路冲击等过程中十分容易受到复杂应力的作用而产生性能退化,影响并联超导带材电流分布的均匀性,给高温超导设备的运行带来安全隐患。本文目的在于研究应力作用下高温超导带材载流性能的变化特性与退化机理
公共租赁住房是政府部门解决中低等收入群体住房问题的主要手段,各级政府部门先后制定了大量政策法规来规范和促进公共租赁住房的发展。而公共租赁住房具有户型标准、布局简单、构件统一等特点,适宜采用产业化的生产方式进行建造,越来越多的公共租赁住房开始推广装配式建造模式。装配式公共租赁住房兼备装配式建筑和公共租赁住房的优点,在我国实现了一定规模的应用与推广。但是目前对装配式公共租赁住房的认识依然不到位,对其所
数字组织病理学全幅图像为计算机化的定量分析提供了新的机遇,越来越多的研究发现基质形态结构和肿瘤微环境中的免疫细胞与癌变细胞的相互作用在多种肿瘤中与病患预后有高度相关性。人类乳突病毒(Human Papilloma Virus,HPV+)口腔癌症是头颈部常见的恶性肿瘤,目前针对于HPV+口腔癌症,没有很好的预后预测工具。本研究利用计算机图像分析和模式识别技术,从高分辨率的数字组织病理学图像中去对口腔
老龄小鼠由于衰老导致生殖能力下降与多种因素相关,个体组织器官氧化应激水平上升是主要因素之一。氧化应激水平受到两方面的影响,一方面与组织器官氧化自由基水平相关,另一方面与抗氧化系统相关。从抗氧化系统来看,含硒酶在抗氧化酶系统中具有重要作用,但个体血硒水平随年龄上升而下降。本试验旨在探讨饲料中添加亚硒酸钠对缺硒老龄ICR小鼠生殖能力的影响。首先,老龄雌性ICR小鼠用缺硒饲料(0.08 mg·kg-1S
太阳能已经被人类开发利用了上百年的时间,在生活中无处不在,光伏(Photovoltaic,PV)材料的开发变得越来越重要。制作PV材料的两个最大问题在于限制成本和提高效率,而受单晶硅太阳能电池的材料成本和制作工艺的影响,其价格居高不下,因此,寻找新型PV材料,提高转换效率和降低成本成了当下紧迫的研究内容。黄铁矿FeS2由于其丰富性,没有任何毒性,在自然界中触手可得,且具有良好的光吸收特性,在近些年
光伏组件安装在室外,发电效率受外界环境因素的影响较大。组件表面极易沉积灰尘,尤其是自然降雨后,部分灰尘会形成顽固污渍,更难清除。研究表明,六个月以上不清除组件表面的灰尘,组件的发电效率会降低50%左右。此外,灰尘颗粒的遮挡效应也会导致组件形成热斑,缩短光伏组件的使用寿命。因此,本文针对如何缓解光伏组件表面的覆灰问题,围绕透明超疏水薄膜制备方法和提高光伏组件输出效率开展了以下研究:(1)分析了光伏组