四味葛花汤解酒保肝实验研究和药效物质基础预测

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目的:  葛花是中国传统医学中最具代表性的解酒药物,本实验以葛花为主料,结合古药方解酒理论,在解酒方高频药物中选取了三味药食同源辅料,使用常规剂量,编制解酒方,研究其对急性酒精中毒小鼠的解酒和保肝作用,并初步探讨其作用机制;最后通过分子对接模拟方法,将药物的主要成分进行蛋白对接分析,探讨其解酒保肝的药效物质基础和作用靶点,为中药防治急性酒精中毒开拓新的思路。  方法:  ⑴护肝防醉酒实验:SPF级昆明种小鼠,雌雄对半,22±2g,随机分为空白对照组、模型组、葛花解酲汤组、四味葛花汤(高、中、低剂量组)。除空白组给予等容积纯化水外,其余给予56度白酒灌胃建立急性酒精中毒的小鼠模型。造模前30min预防性给予葛花解酲汤和四味葛花汤进行干预,空白组、模型组给予等容积的纯化水。观察小鼠的醉酒情况,血中乙醇浓度,血清ALT、AST和检用ELISA法测肝组织匀浆乙醇脱氢酶(ADH)的活性。⑵分子对接研究:通过文献查找以及中国天然产物化学数据库检索四味葛花汤的化学成分,构建四味葛花汤化学成分分子数据库;通过Atoudocking vina1.分子对接平台,选取ADH、ALDH、COX-2和OPRM1、NOS、TNF-a6个靶点蛋白选为受体、对四味葛花汤化学成分进行虚拟筛选;用Cytoscape分析活性成分与靶点的网络关系。  结果:  ①四味葛花汤组小鼠的酒精耐受时间较模型组、葛花解酲汤组显著延长,四味葛花汤组小鼠由“醉酒”到“醒酒”的睡眠持续时间时间较模型组、葛花解酲汤组显著缩短,各组差异均有统计学意义(P<0.01)。四味葛花汤高、中、低剂量组的药效作用强度有一定的量效关系,高剂量组解酒作用更明显。②四味葛花汤组各个时相(0.5h、1.5h、3h)的血中乙醇浓度(mg/ml)较模型组显著降低,各时间点均有统计学意义(P<0.01)。③四味葛花汤组小鼠肝组织匀浆ADH活性较正常组、模型组高,具有极显著性差异(P均<0.01)。④四味葛花汤组小鼠的血清AST和ALT的含量较模型组明显降低,有统计学意义(P均<0.01)。⑤构建了含有308个化合物的四味葛花汤化学成分分子数据库,以ADH、ALDH、COX-2、OPRM1、NOS和 TNF-a为靶点,以原配体打分值为阈值,从四味葛花汤化学成分分子中分别筛选出与其结合较好的化合物168、53、20、86、86、17个,视为四味葛花汤的药效物质基础。网络特征研究结果显示药效物质基础对酒精酒精中毒的治疗靶点不是线性关系,大部分化合物只能作用于一个靶点,仅有小部分化合物能作用于多个靶点。  结论:  ⑴四味葛花汤有良好的防醉、解酒作用:可显著延长急性酒精中毒小鼠“醉酒”时间,增强对酒精的耐受力;缩短急性酒精中毒小鼠由“醉酒”状态到“醒酒”状态的时间,促进醉酒小鼠的苏醒,其机制可能是减少酒精在胃肠道的吸收和诱导肝组织中ADH活性的增强加速酒精在肝脏的代谢,从而降低小鼠血中酒精的浓度。⑵四味葛花汤具有良好的保肝作用:可显著降低急性酒精中毒模型小鼠血清ALT、AST活性。⑶分子对接发现四味葛花汤的药效物质基础包含了257个化合物,能作用于6个治疗靶点,其中有135个起多靶点导向作用;其中四味葛花汤与酒精代谢相关蛋白的亲和力最好,推测其作用机制最主要是通过增加体内酒精代谢相关酶的活性继而产生解酒效果。
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