目的(1)克隆人癌胚抗原(carcinoembryonic antigen)基因片段,构建pcDNA3.1-CEA基因疫苗。(2)检测其在人舌癌Tca8113细胞株(human tongue squamous cell carcinoma cell line8113,Tca8113)中的表达。方法(1)采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人结肠癌组织中扩增出人CEA基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,构建成pcDNA3.1-CEA基因疫苗。(2)通过用酶切、PCR扩增电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。(3)转染人舌癌Tca8113细胞,以转染空载体组做实验对照组,以未转染的舌癌细胞作空白对照组,通过RT-PCR和免疫组化检测其在人舌癌Tca8113细胞中的表达。结果(1)经酶切、PCR扩增电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人CEA-cDNA。(2)经RT-PCR和免疫组化证实:与实验对照组和空白对照组相比较,转染pcDNA3.1-CEA后的人舌癌Tca8113细胞内CEA mRNA的转录和蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(p<0.05);实验对照组和空白对照组相比较CEA mRNA的转录和蛋白的表达差异无统计学意义(p>0.05)。结论本实验成功构建CEA基因疫苗并在人舌癌Tca8113细胞株中得到表达。