胚胎着床是一个非常复杂的生物过程,是多种因素协同作用的结果。胚胎着床的一个重要特征即是子宫内膜发生蜕膜化改变,该过程受到多种因子的调控。其中,MicroRNA差异性的表达在胚胎着床的精细调控起着重要作用。课题组前期通过芯片筛查发现mmu-miR-100在胚胎植入第5天着床点和着床旁存在明显的差异。本文以mmu-miR-100为研究对象,探讨其在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律及在胚胎着床中的作用,为不育症的诊断和治疗提供新的思路。方法1.本实验采用荧光定量PCR方法验证芯片结果,用原位杂交方法定位妊娠早期d1,d4,d5及d6小鼠子宫内膜mmu-miR-100的表达水平。2.取早孕小鼠子宫内膜基质细胞进行原代培养,分别用mmu-miR-100模拟物和抑制剂对基质细胞进行转染。3.流式细胞术检测mmu-miR-100对小鼠子宫内膜基质细周期和细胞凋亡的影响。4.运用基因预测数据库检索mmu-miR-100调控的靶基因。实验结果1.定量PCR结果发现mmu-miR-100的含量在妊娠第5天和第6天胚胎着床旁组织的含量高于着床点(P<0.05),与我们前期实验组的芯片结果保持一致。2.原位杂交的结果显示mmu-miR-100在妊娠第5天主要表达在基质细胞,腔上皮、腺上皮较少表达。第6天基质细胞广泛表达,且主要表达在次级蜕膜化区。3.体外培养基质细胞,转染模拟物后,流式细胞术检测结果表明细胞凋亡率明显增加;而细胞增殖无变化。4.结合生物信息学分析和前期的实验结果,mmu-miR-100作用的靶基因有IGF2,PLK1,mTOR,FKBP51,FRAP1等。结论1.mmu-miR-100在早孕小鼠胚胎着床d5,d6着床点和着床旁组织存在着明显的差异表达,且着床点主要表达于子宫内膜蜕膜区。2.mmu-miR-100通过影响胚胎着床过程中子宫内膜基质细胞的凋亡,调控基质细胞蜕膜化。