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金钗石斛（Demdrobium nobile LindL.）主产贵州、云南、广西、四川等地,是历版《中国药典》收载的石斛正品之一,具有养阴清热、益胃生津的功效。与铁皮石斛、霍山石斛等石斛同是我国传统名贵中药,在《神农本草经》、《本草纲目拾遗》、《本草纲目》等典籍中均有记载,其中,金钗石斛滋阴清热、益胃生津的功效尤其明显,这与金钗石斛中的成分密切相关。金钗石斛中的石斛碱是金钗石斛中的主要成分,在历版中国药典中,石斛碱是金钗石斛的含量测定的指标性成分,在国内也有一些关于石斛多糖的含量测定的研究报道,但未见金钗石斛黄酮苷的含量测定的报道。本研究是在课题组长期研究石斛类指纹图谱的基础上提出的一个研究思路:金钗石斛的酚类全指纹图谱与铁皮石斛、霍山石斛等主要几种药用石斛的图谱具有很大的差异性,不同石斛的黄酮苷成分明显不同,可用于石斛类的鉴别,且赤水金钗石斛与其他产地的金钗石斛指纹图谱有差异,赤水产地的金钗石斛存在峰面积占比较大的特征性图谱峰,故本实验对此成分进行提取分离纯化、含量测定及抗氧化研究,希望为金钗石斛的质量控制提供一定的研究基础。目的:1、本文以贵州省赤水市金钗石斛茎为原料,对此进行提取、分离、纯化得到金钗石斛黄酮苷,为开展金钗石斛的特征性黄酮苷成分含量测定研究提供基础,为金钗石斛的质量控制提供研究基础。2、通过HPLC建立金钗石斛黄酮苷的含量测定方法,并测定十批金钗石斛的含量。3、以赤水金钗石斛黄酮苷为指标性成分,测定不同产地的金钗石斛、不同品种的石斛是否含有此成分,探索赤水金钗石斛黄酮苷的特异性。4、建立MSC氧化损伤模型,通过MTT法检测不同浓度黄酮苷对MSC氧化损伤的修复作用,研究金钗石斛黄酮苷的抗氧化能力,为开展进一步的药理研究提供基础。方法:1、本次实验中,运用溶剂提取法、有机溶剂萃取法将金钗石斛中的目标成分提取出来,综合运用大孔树脂、羟丙基葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）、碳十八反向硅胶几种色谱分离方法,分离纯化得到金钗石斛黄酮苷。经过化合物的理化性质及现代波谱学分析,鉴定出此单体的结构。2、以分离得到的金钗石斛黄酮苷为对照品,通过RP-HPLC测定赤水十批金钗石斛茎中的含量。色谱条件AgiLentSB-Aq柱;流动相:乙腈（A）-0.2%（体积分数）磷酸（B）,梯度洗脱:0～10min 5%A→16%A,10～30min 16%A→25%A;检测波长:270nm;流速:1.OmmL/mL-1。3、采用高效液相法,色谱条件:AgiLentSB-Aq柱;流动相:甲醇（A）-0.2%（体积分数）磷酸（B）,梯度洗脱:0～10min 25%A→30%A,10～15min 30%A→33%A;15～25min 33%A→35%A;25～40min 35%A;40～60min 35%A→50%A;检测波长:340nm;流速:1.0mL/mL-1。以分离得到的赤水金钗石斛黄酮苷为对照品,鉴别不同产地的金钗石斛及不同品种石斛的含此成分的研究。4、分离得到原代骨髓间充质干细胞,建立其氧化损伤模型,通过MTT法检测黄酮苷对H202致骨髓间充质干细胞氧化损伤的保护作用。结果:1、本实验分离鉴定了金钗石斛酚类成分中含量较大的成分——金钗石斛黄酮苷（芹菜素-6-C-α-鼠李糖-8-C-β-葡萄糖苷）。2、金钗石斛黄酮苷对照品的线性回归方程y=1640.1x-7881.2（r=1）,在0.58μg～14.5 ug范围内呈良好线性,加样回收率（n=6）范围为98.38%～103.33%,RSD为1.69%。根据10批贵州省赤水的样品测定的结果,含金钗石斛黄酮苷范围是0.103%～0.170%。3、本部分对赤水、云南、四川、广西产的金钗石斛与其他品种的石斛进行比较研究,在赤水金钗石斛黄酮苷的相应的出峰位置上,云南产和四川产的金钗石斛均没出现相对应的峰,广西产石斛在相应位置可能含有该成分;铁皮石斛中可能含有赤水金钗石斛黄酮苷,霍山石斛、紫皮石斛、细茎石斛、均不含此成分。4、在增殖试验中,各给药浓度组别和空白组比较,赤水金钗石斛黄酮苷对MSC没有促增殖作用;在对H202致MSC损伤的造模实验中,H202损伤组在600 μM处理2h的条件下抑制率达到50%左右,因此可选择此条件为氧化损伤模型;而当在赤水金钗石斛黄酮苷对H202致MSC的保护实验中,在10-100μg/mL的浓度范围内,黄酮苷对H202致MSC的损伤均具有修复作用（P<0.01）,且具有量效关系,说明赤水金钗石斛黄酮苷对H2O2致MSC损伤有一定的保护作用。结论:1、本研究中赤水金钗石斛黄酮苷的含量范围为0.103%～0.170%,相对于中国药典中的石斛碱的规定含量（不少于0.4%）而言,含量相对较高。2、本研究建立了金钗石斛的含量测定方法,该含量测定方法具有良好的准确性,重复性和稳定性,可用于金钗石斛的质量控制。3、本次不同产地金钗石斛、不同品种石斛与赤水金钗黄酮苷的HPLC比较研究证明了赤水金钗石斛黄酮苷的特异性。4、赤水金钗石斛黄酮苷不同质量浓度组对H2O2致MSC损伤均具有修复作用,各组均有显著性差异（P<0.01）,且具有量效关系,说明赤水金钗石斛黄酮苷对H2O2致MSC损伤有一定的保护作用。