论文部分内容阅读
目的:构建出一种表达目的基因Foxp3的慢病毒表达载体，可以为研究Foxp3的功能以及进一步获得Foxp3靶向的治疗方法提供分子水平的平台。 方法:采用PCR法扩增Foxp3片段，并与pMD18-T载体连接，然后通过琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序验证。通过酶切和再连接等过程再将Foxp3基因片段与pFUGW构成重组质粒，连接产物质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，扩增重组质粒。将含有目的基因Foxp3的重组质粒与包装质粒共转染至293T细胞中进行包装，在摸索成功的条件下包装质粒并提取病毒上清液，依据EGFP的表达水平通过逐孔稀释法测定包装后的病毒滴度。 结果:通过PCR的方法扩增出Foxp3片段。通过pMD18-T载体作为过渡的桥梁，最终将Foxp3目的片段与慢病毒表达载体pFUGW相连接，经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定扩增及构建成功。另外将含有目的基因Foxp3的表达载体与包装质粒共转染至293T细胞中成功包装出病毒，在摸索成功的条件下包装质粒并提取病毒上清液，用孔稀释法测定出该载体包装后的病毒滴度，为体内外Foxp3分子的研究提供了一个平台。 结论:成功扩增目的基因Foxp3片段并构建出Foxp3基因慢病毒表达载体，并且与包装质粒共同进行慢病毒包装，浓缩后测定慢病毒滴度为2E+9(TU/ml)。