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铁是机体细胞生命活动所必需的微量元素之一。细胞内铁稳态（cellular iron homeostasis）的维持对细胞的生长增殖及正常的机能活动来说都是非常重要的。研究发现，转铁蛋白受体（Transferrin Receptor，TfR）、铁蛋白（Ferritin，Fn）和铁调节蛋白（Iron Regulatory Protein，IRP）参与了细胞内铁稳态（cellular iron homeostasis）的维持活动，其中TfR和Fn的表达都受IRP在转录或转录后水平上的调节。目前已知的铁调节蛋白形式有两种即IRP1、IRP2。 白血病是儿童时期较为常见的一种恶性肿瘤疾病，其发病机制目前尚不十分清楚。已有研究证实铁与白血病的发生、发展具有密切的关系。尽管IRP与IRE结合在转录后水平上调节相关基因的表达是当前研究的热点，但对白血病细胞铁代谢及其稳态调控的研究相对较少，尤其是对IRP2在不同铁状态下调控基因转录作用的研究则更少。 本研究以人白血病细胞株HL-60细胞为实验对象，通过加铁和去铁干预试验，探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制以及IRP2在HL-60细胞铁代谢中的郑州大学2004届研究生毕业论文HL·60红11胞IRpZ mRNA、TI’RmRNA、FnmRNA的表达及其，，肿瘤相关基眯1 WT，mRNA的关系‘JI究作用。同时，探讨HL一60细胞中IRPZ、Tfl丈和Fn与肿瘤基因WTI的关系;以揭示白血病细胞铁代谢机制以及铁在白血病发生发展中的作用。方法 按照实验要求，将FeCI:或去铁胺（Desferrioxamine，DFO）加入含有10%胎牛血清的RPMI一1 640培养液中，使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养。实验分为五组，即:FeC13一20组和FeC13一40组（培养液中FeC13终浓度分别为20、40林mol/L）;oFo一50组和nFo一1 00组（培养液中DFo终浓度分别为50、100林mol/L）;对照组（培养液中不加入FeC13和DFO）。细胞培养后，分别于第12小时、24小时和48小时收集各组培养细胞，细胞总RNA的提取参照组织/细胞总RNA提取试剂盒要求进行，提取后液氮冻存。采用RT·PCR半定量法测定IRPZ mRNA、Fn;nRNA、T琅mRNA和wTI:nRNA等指标的相对表达量结果 1.IRP:mRNA:各实验组之间IRP:mRNA的表达量变化不大，经统计学处理，组间差异无统计学意义（F娜庐1.199，P>0.05）。细胞培养时间对IRPZmRNA的表达有影响，经统计学处理，组内差异有统计学意义（F，。二43 .418，尸<0.05），表现为随时间的延长，IRP:mRNA的表达降低。 2.T仅mRNA:各实验组之间的差异有统计学意义（厂w一s二7.184，F。:。.，“113.926，尸<0.01）。在加入去铁胺的DFO一50组和DFO一100组中TfRmRNA的表达升高，并随培养时间的延长和DFO剂量的增加，其表达升高。在加铁的FeC13一20组和FeC13一40组中，与对照组相比较，在12h时TfRmRNA的表达量上升，24h时达到高峰，之后迅速下降。而在48h时，FeCI3一40组的表达量与对照组相比较，约下降2倍，两组的差异具有统计学意义（尸<0.01） 3.Fn mRNA:细胞培养时间对Fn mRNA的表达无明显影响，经统计学处理，组内差异无统计学意义（F，、内月514，尸>仓05）而各实验组之间的差异有统计学意义（F。、。、=209、056，P<0.01）。FeC13一20组和FeC13一40组Fn mRNA的表达量较高，大约是对照组的2倍，它们与对照组比较，差异具有统计学郑州大学2004届研究生毕业论文HL·60幻一l胞IRPZ mRNA、TfRmRNA、FnmRNA的表达及其一与肿瘤相关基l州WT:mRNA的关系研究意义（P<0.05）;而DFO一50组、DFO一100组FnmRNA的表达与对照组相比较，FnmRNA的表达无明显变化（尸>0.05）。 4.IRP:mRNA与T仅mRNA和Fn mRNA的相关性:相关分析结果显示:IRPZ mRNA与T仅mRNA及Fn mRNA的表达均不相关（:=一0.005;r=0.074;P>0 .05）。5.WT，mRNA:各实验组之间T仅mRNA的表达量无明显变化，异无统计学意义（厂，:。.，一l一07，P>0.05）。细胞培养时l’oJ又寸Fn mRNA明显影响，组内差异无统计学意义（F。内=0.5“，尸>0.05）。 组间差的表达无 6.WTI mRNA与IRP:n飞RNA、Fn mRNA以及TfR mRNA的相关性:相关分析结果显示，WT;mRNA的表达与IRPZ mRNA、Fn mRNA以及TfR mRNA的表达均不相关（p>0.05）。结论 1.铁剂和去铁胺是通过IRP:或IRP:mRNA对HL一60细胞的铁代谢产生作用。2.在本实验所用铁剂和去铁胺剂量范围内，铁剂和去铁胺对IRPZ mRNA表达的总量无影响。3.铁剂可能通过影响IRPZ的表达，调控TfR mRNA、Fn mRNA的合成，进而影响HL一60细胞TfR蛋白和Fn蛋白的表达量。4.DFO可能通过影响IRPZ mRNA不同片段的合成，调控TfR mRNA的表达，但对Fn mRNA的表达影响不大。5.IRPZ mRNA与TfR mRNA、Fn mRNA无相关关系。6.铁剂和去铁胺可能不影响HL一60细胞WT，mRNA的表达。7.在Fll mRNAHL一60细胞中，肿瘤基因WT一mRNA与IRPZ mRNA、TfR mRNA、无相关关系。