目的:⑴本实验旨在通过建立重复性强、稳定的大鼠大脑中动脉永久性缺血动物模型,并在此基础上进行神经功能、脑梗死体积、脑组织含水量、病理学改变及水通道蛋白-9(AQP9)mRNA动态表达变化的观察,进而探讨分析大鼠脑缺血损伤中AQP9mRNA动态表达与脑水肿之间的关系以及AQP9在脑缺血损伤中的作用。⑵通过依达拉奉对脑缺血大鼠脑组织中AQP9mRNA表达变化的研究,进而探讨依达拉奉在脑缺血损伤中的保护作用及机制,为急性缺血性脑血管病的临床治疗提供理论和实验基础。方法:采用成年雄性Sprague-Dawley大鼠252只,随机分成假手术组、盐水组、依达拉奉组,每组84只,每组再按术后6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d七个时间点分成7小组,每组12只。采用改良线栓法,用尼龙线对大脑中动脉栓塞,建立永久性脑缺血大鼠动物模型。建模后用Longa神经功能评分方法和Berderson神经功能评分方法对每只大鼠进行神经功能缺损评分,1～3分大鼠进入研究中。试验中缺失的大鼠要随机补充,保证实验动物数量不变。在依达拉奉组,每只大鼠以依达拉奉腹腔注射,剂量为每公斤体重3mg,每12h给药一次;生理盐水组给等剂量的生理盐水;假手术组不给药。在相应的时间点,随机从每小组中选取6只模型动物,处死并快速取出大脑。冠状切去嗅球和额极4mm组织,前额3mm厚脑组织用于脑含水量测定,按照干湿重法公式:(湿重―干重)/湿重×100%,测量脑含水量的百分比。剩下的后半部分用实时荧光定量PCR方法检测AQP9mRNA的表达水平。余下的6只模型被处死,暴露出心脏,用生理盐水200ml左心室灌注。以前囟为中心,2mm厚冠状切取脑片6片,第3片用于组织学检查,予以4%甲醛固定,不同浓度乙醇脱水,石蜡包埋等处理,以每片5μm厚连续冠状切片。余下的5张脑片用TTC染色来观察脑梗死体积改变。结果:⑴本实验用线栓法制作的局灶性脑缺血模型稳定可靠,重复性强。⑵术后进行神经缺损评分发现,由于麻醉和手术创伤的影响,假手术组术后出现6～24h神经功能减退。与假手术组相比,在6h～24h时间段盐水组神经功能下降明显(p<0.05)。依达拉奉组神经功能明显好于盐水组(p<0.05)。术后7天盐水组和依达拉奉组神经功能基本恢复。⑶术后6h～7d假手术组脑水含量几乎没有变化,盐水组脑含水量增加明显,术后48h到达高峰,明显高于依达拉奉组(p<0.05)。⑷在术后各个时间点,实时荧光定量PCR检测盐水组中脑缺血周围组织AQP9mRNA相对假手术组表达明显上调(p<0.05)。在盐水组和依达拉奉组中,脑缺血后6h脑缺血周边AQP9mRNA表达开始逐渐上调,72h到达高峰,而后开始下调,至7d两组表达水平仍高于假手术组;同时还发现在术后各个时间点盐水组和依达拉奉组AQP9mRNA表达水平均明显高于假手术组(p<0.05);AQP9mRNA表达水平与脑含水量相一致,相关性分析显示二者密切相关(r=0.788,p<0.05)。⑸在依达拉奉组和盐水组中,缺血24h脑梗死体积最大;与盐水组相比,术后6～24h依达拉奉组脑梗死体积明显减小(p<0.05)。⑹HE染色显示术后6h在脑缺血区神经元细胞无明显改变,6h后缺血区脑组织逐渐出现肿胀与坏死;在依达拉奉组,脑水肿和神经元坏死病理损害明显较轻,在假手术组脑组织无明显改变。结论:⑴本实验采用大鼠中动脉线栓法,成功地建立了稳定的局灶性脑缺血大鼠动物模型,重复性强,此模型接近临床脑缺血发生过程,适于急性实验研究。⑵盐水组中AQP9mRNA表达水平明显高于假手术组,且AQP9mRNA表达水平与脑水含量存在时间上的相关性。表明AQP9mRNA表达水平与缺血后脑水肿的形成密切相关。提示AQP9可能在脑缺血后脑水肿的形成和继发损伤中产生重要作用。⑶依达拉奉组中脑梗死周边组织脑含水量和AQP9mRNA水平与盐水组相比降低明显;依达拉奉作为自由基清除剂能有效地抑制AQP9mRNA表达和改善脑水肿。提示依达拉奉可能是通过抑制AQP9mRNA表达和改善脑水肿发挥脑保护作用。AQP9mRNA表达水平的调节和修饰将成为防止脑水肿及减轻卒中后脑损害新的策略。通过调节AQP9mRNA表达的方法可能为治疗脑缺血提供新的前景。然而,依达拉奉影响AQP9mRNA表达的机制还不清楚,还需要进一步研究。⑷依达拉奉能有效地减轻缺血后脑水肿、减小脑梗死体积、改善神经功能,在脑缺血损伤中显示良好的脑保护作用。