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移植物抗宿主病（Graft Versus Host Disease，GVHD）是移植物中的免疫活性细胞识别宿主抗原并对宿主产生的病理损伤状态。去除T细胞和应用免疫抑制剂等方法虽然可以明显降低GVHD发生率，但是移植失败率、白血病复发率和感染率均显著增加，未能从根本上解决这一问题。近年来杀伤细胞抑制性受体（Kill cell Inhibitory Receptor，KIR）的发现为负性调节NK、T细胞功能提供了良好的途径，也为防治GVHD提供了新的思路。人与鼠的KIR广泛表达在NK细胞和部分T细胞上，KIR与相应的MHCⅠ类分子结合后传导抑制性信号抑制NK、T细胞的杀伤功能和炎性细胞因子的分泌，从而保护靶细胞免受损伤。本研究试图将能识别受者MHCⅠ类分子的KIR基因转染供者淋巴细胞并进行移植建立一种既降低急性GVHD又保留移植物抗白血病（Graft Versus Leukemia GVL）效应的骨髓移植模式，并从杀伤细胞抑制性受体（KIR）/MHCⅠ识别角度探讨其分子机制，为GVHD的研究提供理论和实验依据。 本研究采用如下方法：（1）将Prof.Raulet赠送的Ly49A cDNA测序，测序正确后构建逆转录病毒表达载体pLXSN-Ly49A，双酶切鉴定正反相。（2）表达载体经PA317细胞包装后转染C57BL/6小鼠的淋巴细胞；流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞（H-2d）和4T1乳腺癌细胞（H-2d）的杀伤活性。（3）将H-2d遗传背景的EL9611红白血病细胞静脉接种给CB6F1H-2d/b小鼠，建立 F；H‘川‘’红白血病模型，为观察半相合异基因骨髓移植后 GVL效应提 供动物模型。K)以C57BL历汁比 V＼鼠为供者，以接种EL96ll红白 血病细胞的BALB儿卜2‘小鼠为受者，预处理条件为全身照射（TBI， 6七。照射9刀Gy人进行脾淋巴细胞混合骨髓细胞移植，建立完全不 相合异基因急性GVHD模型；以亲代C57BL沁卜儿4、鼠为供者，以接 种 EL96ll红白血病细胞的 BALB／CXC57BL／6，FIH”Zd／b（CB6F；）／J’ 鼠为受者，预处理条件为全身照射（TBI，加C。照射10．SGy人 进行 脾淋巴细胞混合骨髓细胞移植，建立半相合异基因急性GVHD模型 并在这两个模型基础上考察 Ly49A基因转染的淋巴细胞对 GVHD和 GVL的作用。 本研究结果显示：门）P＊f R川u1Ct赠送的 Ly49A CDNA测序结果 与其报道的序列完全一致。（）Q扔A基因转染的C57BU6小鼠淋巴 细胞24 小时后受体表达率为O6．67t0．35）％，空载体转染组 ＊．73L0．85)％，未转染对照组＊石0L0．27)％。Ly49A基因转染的 C57BL／6 ’J＼鼠淋巴细胞对BALB／C ’J＼鼠正常成纤维细胞的杀伤活性降 低了（ZI—25）％，对4TI乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变（P＞0刀5）。 门)CB6FI卜川‘红白血病模型已传10代，静脉接种EL9611细胞数 103个／只即可发病。发病时白血病细胞主要浸润肝、脾和骨髓。小鼠 接种10‘J08个／只EL9611细胞时，生存时间与接种细胞数成线性负相 关。此白血病模型对环磷酚胺、阿糖胞昔等化疗药物敏感。（4）在完 全不相合异基因骨髓移植（C57BL历卜儿一BLAB儿卜川）中，未进行移 植的单纯照射组生存期为（6．50L2．41）天；环磷酚胺治疗组生存期为 （20．90f2．88）天；淋巴细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 （17．10L4石5）天；空载体转染的淋巴细胞混合骨髓细胞移植组生存 期为门7．40L5．32)天；Ly49A转染的淋巴细胞混合骨髓细胞移植组 生存期为（35．20L12．52）天，较上述各组生存期明显延长o二0刀00)。 （5）在半刁合异基因移植中（C57BL／6b’bb一CB6FIH”Zd／b），未进年移 植的单纯照射组生存期为 门石0＊3．36)天；环磷酚胺治疗组生存期为 一5 一（ZI了0L2．87）天；淋巴细胞混合骨髓细胞移植组生存期为（29．4f6．43）天；空载体转染的淋巴细胞混合骨髓细胞移植组生存期为（29．IL7．39）天；Ly49A 转染的淋巴细胞混合骨髓细胞移植组生存期为K5．00f12．38)天，较上述各组生存期明显延长0功．00o人 从上述结果可得出如下结论：门)Ly49A基因转染可抑制淋巴细胞对BALB／C ’J’鼠正常成纤维细胞的杀伤活性，而对肿瘤细胞的杀伤活性无明显影响。门)本研究建立的 C57BL伍H“Zb—CB6FI队扣“的急性GVHD模型和可移植性CB6FIH”2“‘红白血病模型，是探讨半相合骨髓移植GVHD和GVL作用的较理想模型。（）Ly49A基因转染的淋巴细胞在半相合及完全异基因骨髓移植模型上均具有一定程度的降低GVHD并且保留GVL的作用。u)杀伤细