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目的观察莱菔硫烷对H9C2心肌细胞冷缺氧/复氧损伤保护作用与剂量和处理时间的关系及相关机制。方法1实验模型的建立和分组:第一部分SFN剂量的探讨:实验随机分为Sham组:H9C2心肌细胞置于5%CO2、37℃常规条件下培养;冷H/R组:用D-hanks液置换常规细胞培养液后,备一密封缺氧盒将H9C2心肌细胞放入,随后密封加压通入95%N2、5%CO230min,再将该缺氧盒置于4℃冰箱冷藏10h,再用常规细胞培养液将D-hanks液置换并将细胞置于培养箱中常规培养4h,SFN5μM预处理组、SFN10μM预处理组、SFN25μM预处理组、SFN100μM预处理组:细胞进行缺氧处理前12h用SFN终浓度为5、10、25、100μM的培养液将常规细胞培养液置换,后续处理与冷H/R组相同;第二部分SFN预处理时间的探讨:实验随机分为冷H/R组;SFN预处理24h组、SFN预处理12h组、SFN预处理8h组、SFN预处理4h组、SFN预处理0.5h组:细胞进行缺氧处理前24、12、8、4、0.5h用SFN终浓度为10μM的培养液将常规细胞培养液置换,后续处理与冷H/R组相同。2检测指标:倒置显微镜下观察对比每组H9C2心肌细胞形态学变化及凋亡程度,采用CCK8法检测各组H9C2心肌细胞的生存活力,各组H9C2心肌细胞的HO-1、NQO1、Bcl-2、Bax等蛋白表达情况采用western blot法检测。结果不同剂量SFN预处理组(5μM组、10μM组、25μM组、100μM组)与冷H/R组相比,心肌细胞生长状态均好于冷H/R组,细胞存活率有不同程度提高(70.49±2.77,76.16±1.38,67.70±3.34,60.08±2.24 vs 54.95±1.54,P<0.05);不同时间SFN预处理组(24h组、12h组、8h组、4h组、0.5h组)与冷H/R组相比,心肌细胞生长状态均好于冷H/R组,细胞存活率有不同程度提高(70.12±3.24,75.78±3.23,68.75±4.15,64.45±3.26,60.21±2.24 vs.56.04±2.23,P<0.01)。各组心肌细胞HO-1和NQO1蛋白表达:Sham组:HO-1和NQO1蛋白表达较弱;与Sham组比较,冷H/R组HO-1和NQO1蛋白水平显著升高(P<0.05);与冷H/R组比较,不同剂量SFN预处理组、不同时间SFN预处理组HO-1和NQO1蛋白水平明显升高(P<0.05),其中以SFN10μM组和SFN12h组最明显;各组心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达:Sham组:Bcl-2和Bax蛋白表达较弱;与Sham组比较,冷H/R组Bcl-2和Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与冷H/R组比较,除SFN100μM组的Bcl-2蛋白水平无差异(P>0.05),其余各组Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05),Bax蛋白水平明显降低(P<0.05),其中以SFN10μM组和SFN12h组最明显,BCL2/Bax比值也是这种情况。结论1 SFN能够通过增加II期酶HO-1、NQO1的表达实现对H9C2心肌细胞冷缺氧/复氧损伤的保护作用。2 SFN能够通过促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抑制促凋亡蛋白Bax的表达、增大Bcl-2/Bax蛋白比值实现对H9C2心肌细胞冷缺氧/复氧损伤的保护作用。3 10μM为SFN发挥保护作用的最佳剂量;12h为SFN发挥保护作用的最佳预处理时间。