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杜仲作为天然产物入药,是我国特有的传统中草药,具有调节血压,调节血脂,抗氧化,抗癌,抗菌消炎等多种药理作用。松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside,PDG)是杜仲的主要降压活性成分,其药用活性需经口服后被肠内菌群及分泌的酶类水解转化为苷元结构才能得以生效。故而本研究创新性的利用磁性四氧化三铁/壳聚糖(Fe3O4/CS)复合载体固定化β-葡萄糖苷酶,在体外提供适宜环境将PDG水解转化为松脂醇二葡萄糖苷苷元(pinoresinol diglucoside aglycone,PDG-A)结构。同时,本文首次对PDG及PDG-A对离体大鼠胸主动脉舒张作用进行了比较研究。为杜仲降压成分治疗心血管疾病提供理论基础及科学依据。本论文的主要内容及结果如下:1.Fe3O4/CS固定化β-葡萄糖苷酶水解PDG的研究。首先使用Fe3O4/CS复合载体固定β-葡萄糖苷酶,得到活力回收率达到89.44%的固定化酶。用固定化酶水解PDG,运用响应面法确定最佳酶水解条件:水解时间:6.17h,水解pH:5.03,水解温度47.8℃,此条件下水解率可达87.69%,与预测值相符。2.PDG酶水解产物的分析。运用高效液相-紫外-质谱联用(HPLC-UV-MS)分析及鉴定PDG水解产物成分及结构,得知其产物极性较小,成分单一,为PDG(M=682)水解掉2个葡萄糖基团(M=162)而成的苷元结构(M=358),运用核磁共振氢谱(1H-NMR)及碳谱(13C-NMR)检测鉴定水解产物结构,最终确定其为PDG-A。3.PDG和PDG-A对离体大鼠胸主动脉血管舒张作用的比较研究。采用离体大鼠胸主动脉对PDG和PDG-A的血管舒张作用进行研究,记录离体血管张力变化,观察比较不同浓度的PDG和PDG-A对氯化钾(KCl)预收缩血管张力的影响,观察比较不同工具药物对二者作用的影响及其在无钙、复钙环境下的作用。实验结果如下:(1)不同浓度的PDG和PDG-A对基础状态下的血管张力无影响。(2)PDG和PDG-A对KCl预收缩血管均可产生浓度依赖性的舒张作用,其中PDG-A的舒张作用明显高于PDG。PDG作用于预收缩的血管使其舒张率达到35.2%,同样浓度的PDG-A使其舒张率达到80.36%,PDG-A对预收缩血管的舒张作用比PDG高出50.16%。(3)PDG和PDG-A对血管的舒张作用均具有内皮依赖性。PDG使内皮完整血管和去内皮血管的舒张率分别达到33.51%和3.06%,PDG-A使内皮完整血管和去内皮血管的舒张率分别达到81.12%和5.26%,PDG及PDG-A对内皮完整血管和去内皮血管的舒张作用差异显著(P<0.05)。(4)PDG和PDG-A对血管的舒张作用可能均与血管舒张因子一氧化氮(NO)的释放有关。用左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)预孵的血管环,阻滞NO的释放,经KCl预收缩,PDG和PDG-A舒张血管的舒张率分别达到14.29%和12.82%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。(5)PDG和PDG-A对血管的舒张作用可能均与血管舒张因子前列环素(PGI2)的释放有关。用吲哚美辛(Indo)预孵的血管环,阻滞PGI2的释放,经KCl预收缩,PDG和PDG-A舒张血管的舒张率分别达到15.67%和17.86%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。(6)PDG和PDG-A对血管的舒张作用可能均与钾离子通道无关。用四乙胺(TEA)、4-氨基吡啶(4-AP)和格列苯脲(Gli)(三种钾通道阻滞剂)分别预孵的血管环,经KCl预收缩,PDG舒张血管的舒张率分别达到TEA组35.07%、4-AP组31.62%、Gli组40.74%;PDG-A舒张血管的舒张率分别达到TEA组73.42%、4-AP组78.75%、Gli组76.25%,与对照组相比差异均不显著(P>0.05)。(7)PDG和PDG-A均可一定程度的抑制内钙释放及外钙内流导致的血管收缩。在无钙环境中,分别以PDG和PDG-A预孵血管环,加入去甲肾上腺素(NE),出现短暂收缩,收缩幅度分别为17.86%和8.57%,显著小于对照组36.9%,知二者可一定程度的抑制内钙释放导致的血管收缩;加入氯化钙(CaCl2),再次出现收缩分别为57.14%和32.86%,显著小于对照组82.14%,知二者可一定程度的抑制外钙内流导致的血管收缩。综上,PDG-A对血管的舒张作用显著高于PDG;二者的血管舒张作用皆具有浓度依赖性及内皮依赖性,作用机制可能与血管舒张因子NO,PGI2的释放有关,可一定程度抑制内钙释放及外钙内流导致的血管收缩。