腺病毒介导的IL-24基因转移对LPS诱导的系膜细胞增生的抑制作用

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【目的】①观察腺病毒介导的IL-24基因转移对LPS诱导的系膜细胞增生的影响,并探索其对系膜细胞LPS诱导的系膜细胞的细胞周期调节蛋白p21、p27和CyclinE的影响;②探讨腺病毒介导的IL-24基因转移对系膜细胞分泌细胞因子的影响。【方法】①IL-24腺病毒载体构建及扩增通过RT-PCR方法构建IL-24腺病毒载体,并经序列分析证实。腺病毒载体在293细胞中扩增。②肾小球系膜细胞培养、分组及腺病毒感染系膜细胞在5%FCS/DMEM中培染Ad.IL-24;LPS组:在5%FCS/DMEM中加LPS(10mg/L),感染Ad.GFP;LPS+IL-24组:在5%FCS/DMEM加LPS(10mg/L),感染Ad.IL-24。培养后分别取24小时、48小时提取细胞样本或培养上清。③RT-PCR和ELISA方法检测IL-24在GMC中的表达,ELISA方法检测IL-1、IL-6的表达。④用MTT法和流式细胞术检测GMC增生。⑤用western-blot检测p21、p27及CyclinE的表达。⑥用AnnexinV/FITC流式细胞术检测GMC凋亡。【结果】①对照组系膜细胞无IL-24表达,Ad.IL-24感染GMC后4小时到48小时IL-24有稳定表达。②IL-24无诱导系膜细胞增生活性,而LPS可明显诱导GMC增生,IL-24则可明显抑制LPS诱导的GMC增生,但仍高于对照组。③LPS干预后的系膜细胞周期调节蛋白p21、p27表达下调,CyclinE表达上调;转染IL-24的系膜细胞p21、p27表达上调而CyclinE表达下调。④IL-24基因转移上调系膜细胞IL-6分泌,而对系膜细胞分泌TNF-α无明显影响。【结论】①IL-24基因转移可使LPS诱导的系膜细胞增殖受到抑制。②外源性IL-24基因可诱导系膜细胞凋亡,使细胞周期负调控蛋白p21、p27表达上调的同时使细胞周期正调控蛋白CyclinE表达下调,使系膜细胞生长抑制,被阻滞在G0/G1期,这可能是IL-24抑制LPS诱导的系膜细胞增殖的作用机制。③外源性IL-24基因转移可使系膜细胞分泌IL-6上调,而对系膜细胞分泌TNF-α无明显影响。
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