【摘 要】
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软骨由于其无血管、低细胞密度、低增殖活性等特点,在损伤、磨损或骨关节炎等常见疾病导致其退化后不能再生。目前用于临床的治疗策略如清创、微骨折、自体软骨细胞移植和嵌合成形术都有其局限性,因此,软骨缺损修复在临床上仍具有极大挑战性。近年来,以重建复杂结构和生物力学性能的原生组织为目的的组织工程为软骨修复提供了新技术,其中具有缓释特性的生物支架的构建是该领域重要研究方向之一。本研究设计制备了负载鹿茸多肽(
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软骨由于其无血管、低细胞密度、低增殖活性等特点,在损伤、磨损或骨关节炎等常见疾病导致其退化后不能再生。目前用于临床的治疗策略如清创、微骨折、自体软骨细胞移植和嵌合成形术都有其局限性,因此,软骨缺损修复在临床上仍具有极大挑战性。近年来,以重建复杂结构和生物力学性能的原生组织为目的的组织工程为软骨修复提供了新技术,其中具有缓释特性的生物支架的构建是该领域重要研究方向之一。本研究设计制备了负载鹿茸多肽(VAPs)的I型胶原(COLⅠ)-Ⅲ型胶原(COLⅢ)基复合支架,通过其微纳结构实现了VAPs的控制释放,并构建了兔膝关节软骨缺损模型,植入上述制备的支架研究其对动物软骨缺损修复的效果,具体步骤如下:(1)COLⅠ-COLⅢ基复合支架的最佳比例确定。以COLⅠ和COLⅢ为原料通过共混、冷冻干燥、交联、再次冷冻干燥等步骤制备不同质量比的COLⅠ-COLⅢ基复合支架;对其孔隙率、溶胀率、热水溶失率、接触角、压缩模量和生物相容性等进行研究和表征,最终确定比例为1:1组COLⅠ-COLⅢ基复合支架为最佳材料。(2)负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架的制备及生物相容性研究。制备多孔VAPs-(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)微球,然后用物理吸附法将制得的VAPs-PLGA微球均匀复合于COLⅠ-COLⅢ基复合支架中,最后得到负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架;对制备的负载VAPs的COL I-COLⅢ基复合支架进行体外释放动力学研究,结果表明其负载的多肽释放长达21天以上,符合材料设计对控制释放的要求;将SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养至第三代接种到上述制备的支架及其浸提液中,通过MTT和吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色实验,检测BMSCs的粘附、增殖和活力情况。负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架具备良好的生物相容性,材料本身及其浸提液均可增加BMSCs的活性。(3)负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架对兔膝关节软骨缺损动物模型的软骨缺损修复作用。建立关节软骨缺损动物模型,分别将最佳比COLⅠ-COLⅢ基复合支架和负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架植入缺损区。分别在4、8、12、16W处死动物,取出标本,并对软骨缺损的修复效果进行多因素(大体观察、Micro-CT扫描观察、组织学染色和组织学评分等)评价。结果显示,与(1:1)COLⅠ-COLⅢ基复合支架组相比,负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架组在16周时,缺损部位完全被填充且与周围组织界限难以辨别,组织学评分为15.3分(总分16分),与模型对照组和未负载VAPs的复合支架组比较均有显著性差异。综上,负载VAPs的COLⅠ-COLⅢ基复合支架可有效修复动物膝关节软骨缺损,其修复效果可能与复合支架的组成、结构以及其对VAPs的控缓释有关。
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