目的:获得利玛原甲藻(Prorocentrum lima)聚酮合成酶(polyketide synthase,PKS)基因,进行序列分析和同源性比较;观察不同生长期、不同营养盐条件下利玛原甲藻的产毒情况及PKS基因的表达变化,分析PKS基因与藻毒素合成的关系,揭示PKS在腹泻性贝毒(diarrheic shellfish poisoning,DSP)合成中的作用。方法:采用兼并引物,通过PCR技术获得利玛原甲藻可能存在的Ⅰ型PKS基因;并对所获得PKS基因的同源性进行分析,构建基于PKS氨基酸序列的系统进化树;采用RT-PCR技术初步分析PKS基因在利玛原甲藻中的表达状况;并通过多聚腺苷酸RNA的扩增、细菌的分离鉴定、限制性内切酶酶切、Southernblotting等技术对PKS基因进行分析;观察利玛原甲藻不同生长期、不同营养盐条件下DSP毒素的生成情况,采用半定量RT-PCR方法分析相应条件下聚酮合成酶基因的表达状况。结果:克隆得到利玛原甲藻PKS基因,发现该基因在利玛原甲藻中有显著表达。系统进化分析显示,利玛原甲藻PKS基因与海洋原甲藻聚为一支。以Oligo(T)引物进行RT-PCR扩增时,可出现18S rRNA和PKS基因相应条带;限制性内切酶酶切和Southern blotting结果显示,该基因中存在明显的甲基化;16S rRNA基因序列分析显示,从利玛原甲藻培养液中分离到的细菌与海洋放线菌假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)基因序列同源性达到99%,说明该菌株中并不存在PKS基因,表明本文所获得的PKS基因确实来源于利玛原甲藻,基因序列已提交GenBank(EF521601)。不同生长期、不同营养条件下利玛原甲藻中单位细胞OA的含量有所不同,PKS基因的表达也不同。单位细胞OA含量与PKS基因表达量成明显正相关,R~2分别为0.9807和0.9831,提示PKS基因的表达可能在DSP毒素的合成中发挥重要作用。结论:成功获得利玛原甲藻PKS基因,PKS基因的表达与毒素的合成成明显的正相关,表明PKS可能在腹泻性贝毒合成中发挥重要作用。