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目的NF-κB P65通过Wnt信号通路调控HSCs活化在肝纤维化进展中发挥着重要作用。本研究通过慢病毒感染HSC-T6沉默NF-KBP65的表达,探讨NF-KBP65通过Wnt/β-catenin信号通路调控HSCs活化的分子机制。在此基础上,以HSC-T6及CCl4诱导肝纤维化模型大鼠为研究对象,研究鳖甲寡肽I-C-F-6对NF-κB P65及Wnt/β-catenin信号通路的信号分子、下游靶基因表达水平的影响,明确鳖甲寡肽I-C-F-6通过NF-κB P65及Wnt/β-catenin信号通路调控HSCs活化的分子机制及抗肝纤维化的作用机理。方法1.慢病毒感染 HSC-T6,Western blotting 及 PCR 检测 NF-κB P65、Wnt/β-catenin信号通路信号分子和下游靶基因的表达水平。2.细胞流式、Western blotting等检测HSC-T6增殖、凋亡、NF-κB P65及Wnt/β-catenin信号通路信号分子和下游靶基因的表达水平。3.HE、masson染色、ELISA等检测CCl4诱导肝纤维化大鼠胶原沉积、炎症及肝纤四项的表达水平。4.ELISA、免疫组化、Western blotting等检测CCl4诱导肝纤维化大鼠NF-κB P65、Wnt/β-catenin信号通路信号分子及下游靶基因的表达水平。结果1.慢病毒感染未沉默NF-κBP65的表达时,HSC-T6中β-catenin、P-GSK-3β、TGF-β1和α-SMA蛋白水平高表达,同时MMP-2,9mRNA水平低表达。2.慢病毒感染沉默HSC-T6中NF-κB P65的表达后,β-catenin及P-GSK-3β的表达减少,同时TGF-β1和α-SMA表达水平降低。3.鳖甲寡肽 I-C-F-6 可抑制 HSC-T6 中 NF-κB P65 及β-catenin、P-GSK-3β、P-AKT蛋白的表达水平,同时降低TGF-β1和α-SMA的表达,达到抑制其增殖,促进其凋亡的目的。4.鳖甲寡肽I-C-F-6可抑制纤维化大鼠NF-κB P65及β-catenin、P-GSK-3β、P-AKT蛋白的表达,调控其下游相关靶基因的表达,从而缓解纤维化大鼠肝损伤及促进胶原降解。结论1.未沉默 HSC-T6 中 NF-κB P65 表达时,β-catenin 及 P-GSK-3β高表达,表明Wnt信号通路处于激活状态;TGF-β1和α-SMA表达水平升高表示HSCs活化。2.HSC-T6中NF-κκB P65表达沉默后,β-catenin及P-GSK-3β的表达减少,表明Wnt/β-catenin信号通路的激活被抑制,进一步抑制HSCs的活化。其机制可能与NF-κB P65沉默后直接抑制β-catenin的表达,或抑制GSK-3β磷酸化而促进β-catenin降解,进一步调控其下游靶基因表达有关。3.鳖甲寡肽I-C-F-6可抑制HSC-T6的增殖并促进其凋亡,同时抑制其TGF-β1和α-SMA的表达。表明鳖甲寡肽I-C-F-6可通过降低HSC-T6中NF-κB P65的表达,进而调控Wnt/β-catenin信号通路的激活,进一步抑制HSCs的活化。4.鳖甲寡肽I-C-F-6能够明显缓解肝纤维化大鼠肝损伤,减少ECM沉积,这可能与鳖甲寡肽I-C-F-6可抑制NF-κB P65及Wnt/β-catenin信号通路的活化,进而调控其下游CTGF、TGF-β1、TNF-α和VEGF等各种细胞因子的表达水平有关。综上所述,沉默HSC-T6中NF-κB P65的表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,表明NF-κB P65可通过Wnt/β-catenin信号通路调控HSCs活化,影响肝纤维化的发生发展;鳖甲寡肽I-C-F-6可减少肝纤维化大鼠及HSC-T6中NF-κB P65的表达,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,影响下游靶基因的表达,进一步抑制HSCs活化,缓解肝纤维化大鼠肝损伤,减少ECM的沉积,达到抗肝纤维化的目的,这可能是鳖甲寡肽I-C-F-6抗肝纤维化的作用机制之一。