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本文以抗鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)活性筛选结果为导向,通过正相硅胶、反相硅胶、聚酰胺、SephadexLH-20葡聚糖凝胶、高效液相等柱色谱方法,对抗菌活性强的苦参80%乙醇超声提取液(MIC95约为512μg/mL)的乙酸乙酯部位进行化合物分离纯化,利用核磁共振波谱、质谱等对化合物进行结构鉴定,共鉴定出24个化合物,其中包括两个新化合物5-甲氧基-7-羟基-8-薰衣草基色原酮[(-)-5-Methoxy-7-hydroxy-8-1avandulyl-chromone](13)和(-)-(2S,βS)-苦参双黄酮[(-)-(2S,βS)-SophobiflavonoidCE](19)、1个首次分离化合物2,5-二羟基苯甲酸(2,5-Dihydroxybenzoic acid)((24)及21个己知化合物,高丽怀素(-)-(6aR,11aR)-Maackiain(1)、(-)-(2S)-8-异戊烯基柚皮素[(-)-(2S)-8-Prenylnaringenin](2)、(-)-(2S)-ExiguaflavanoneK(3)、槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)、里查酮A[(-)-(2S)-LeachianoneA](5)、苦参醇E[(-)-(2S)-KushenolE](6)、里查酮G[(-)-(2S)-LeachianoneG](7)、苦参醇F(Kushenol F)(8)、苦参酮[(-)-(2S)-Kurarinone](9)、苦参醇[(-)-(2S)-Kurarinol](10)、(-)-(2R,3R)-3,7,4’-三羟基-5-甲氧基-8-异戊烯基二氢黄酮醇[(-)-(2R,3R)-3,7,4’-Trihydroxy-5-methoxy-8-prenylflavanone](11)、异黄腐醇[(-)-(2S)-Isoxanthohumol](12)、(-)-(2S)-2’-甲氧基苦参酮[(-)-(2S)-2’-Methoxykurarinone](14)、苦参醇Ⅰ[(+)-(2R,3R)-KushenolⅠ](15)、毛蕊异黄酮(Calycosin)((16)、苦参啶(Kuraridin)((17)、苦参醇A[(-)-(2S)-KushenolA](18)、三叶豆紫檀苷(Trifolirhizin)((20)、苦参醇D(KushenolD)((21)、苦参醇N[(-)-(2R,3S)-KushenolN](22)和苦参醇O(Kushenol O)((23)。对所分离的黄酮类化合物通过肉汤稀释法进行体外抗鲍曼不动杆菌活性筛选,结果显示,化合物1、2、5、15均表现出剂量依赖性抗菌活性,化合物2的MIC95为128-256μg/mL,化合物1、5、15的MIC95为256-512μg/mL。槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)在512μg/mL时抑菌活性虽然较弱,但其在低剂量8μg/mL时抑菌率就可达到45.05±1.77%,提示这5个黄酮类化合物是苦参抗鲍曼不动杆菌主要活性成分。通过构效关系分析推测C5位羟基被甲氧基的取代可降低苦参中二氢黄酮抗鲍曼不动杆菌活性;与二氢黄酮相比,苦参二氢黄酮醇中C3位羟基的存在能够增强其活性。此外,苦参二氢黄酮醇的抗鲍曼不动杆菌活性大于其查尔酮类似物,高丽怀素羟基的糖苷化会使其抗鲍曼不动杆菌活性完全消失。
基于上述成果,本论文首次建立苦参80%乙醇提取物中14种黄酮类化合物的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法及其指纹图谱,测定了13批苦参提取物中14种黄酮类化合物的含量。通过对抗鲍曼不动杆菌活性强的提取物S1中黄酮含量进行分析,结果表明抗菌活性极弱的苦参酮[(-)-(2S)-Kurarinone](9)含量最高(7.29%),其次是抗菌活性较弱的槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)(含量为5.29%),抗菌活性较强的4个黄酮中,苦参醇Ⅰ[(-)-(2R,3R)-KushenolⅠ](15)和里查酮A[(-)-(2S)-LeachianoneA](5)的含量较高,分别为1.15%和0.77%,高丽槐素[(-)-Maackiain](1)和(-)-(2S)-8-异戊烯基柚皮素[(-)-(2S)-8-Prenylnaringenin](2)含量较低,分别为0.37%和0.12%。采用正交信号校正-偏最小二乘回归(OSC-PLSR)分析方法建立14个化合物含量和鲍曼不动杆菌抑制率之间的量效关系模型,确定了5个化合物含量与鲍曼不动杆菌抑制率密切相关,其中三叶豆紫檀苷(Trifolirhizin)((20)、异黄腐醇[(-)-(2S)-Isoxanthohumol](12)和槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)呈正相关,苦参醇N[(-)-(2R,3S)-KushenolN](22)和苦参酮[(-)-(2S)-Kurarinone](9)呈负相关。OSC-PLSR模型的校正集及验证集样本的预测值与参考值相关性较好(R2Y=0.868),因此,可通过苦参药材80%乙醇提取物的14个黄酮类化合物的含量分析来预测其抗鲍曼不动杆菌活性。
基于上述成果,本论文首次建立苦参80%乙醇提取物中14种黄酮类化合物的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法及其指纹图谱,测定了13批苦参提取物中14种黄酮类化合物的含量。通过对抗鲍曼不动杆菌活性强的提取物S1中黄酮含量进行分析,结果表明抗菌活性极弱的苦参酮[(-)-(2S)-Kurarinone](9)含量最高(7.29%),其次是抗菌活性较弱的槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)(含量为5.29%),抗菌活性较强的4个黄酮中,苦参醇Ⅰ[(-)-(2R,3R)-KushenolⅠ](15)和里查酮A[(-)-(2S)-LeachianoneA](5)的含量较高,分别为1.15%和0.77%,高丽槐素[(-)-Maackiain](1)和(-)-(2S)-8-异戊烯基柚皮素[(-)-(2S)-8-Prenylnaringenin](2)含量较低,分别为0.37%和0.12%。采用正交信号校正-偏最小二乘回归(OSC-PLSR)分析方法建立14个化合物含量和鲍曼不动杆菌抑制率之间的量效关系模型,确定了5个化合物含量与鲍曼不动杆菌抑制率密切相关,其中三叶豆紫檀苷(Trifolirhizin)((20)、异黄腐醇[(-)-(2S)-Isoxanthohumol](12)和槐黄烷酮G[(-)-(2S)-SophoraflavanoneG](4)呈正相关,苦参醇N[(-)-(2R,3S)-KushenolN](22)和苦参酮[(-)-(2S)-Kurarinone](9)呈负相关。OSC-PLSR模型的校正集及验证集样本的预测值与参考值相关性较好(R2Y=0.868),因此,可通过苦参药材80%乙醇提取物的14个黄酮类化合物的含量分析来预测其抗鲍曼不动杆菌活性。