盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一,陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产,是人类迫切需要解决的问题,培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因,人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na~+/H~+逆向运输蛋白基因,构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体,并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草,验证AtNHX1基因的耐盐功能,为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下:1.根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物,以拟南芥cDNA为模板,通过PCR克隆方法,分离到了AtNHX1基因,并构建了植物表达载体pBI121*-AtNHX1。2.优化了以烟草SR-1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系—分化培养基组成MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,叶片预培养2d,利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*- AtNHX1)浸泡叶片8min,共培养2d,置于MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽,抗性芽经过生根培养基生根,移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR-1,获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表达。3.转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强,可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻,创造寒区耐盐转基因水稻材料。