卵巢癌是全世界范围内女性生殖系统肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤。早期临床症状的不明显和肿瘤特异性标记物的缺乏,使卵巢癌的早期诊断愈发困难。由于卵巢癌具有腹腔侵袭和种植的特点,使得卵巢癌患者不能得到彻底的根治。卵巢癌的常规治疗(包括肿瘤细胞减灭术和化疗药物治疗)虽然能去除癌症肿物,却忽视了治疗后那些能够存活下来的对化疗耐药的卵巢癌肿瘤干细胞(cancer stem cell, CSC)。CSC是存在于肿瘤组织中的具有自我更新和分化为异质性肿瘤群的一群细胞,在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着重要作用。近来,关于卵巢癌CSC和肿瘤干细胞样细胞(cancer stem cell-like cells, CSC-LCs)的成功分离和鉴定已有报道。进一步研究发现,细胞表面的CD44分子在人类卵巢癌CSC中的表达上调。大量有力证据表明,CD44分子与肿瘤的发生、发展密切相关。如果用抗CD44的单克隆抗体去封闭CSC表面的CD44分子,势必会对卵巢癌CSC的生长产生一定程度的影响。这些研究将为特异性锚定CSC的新型肿瘤靶向治疗策略提供一些新思路。为了给卵巢癌靶向治疗策略及其它相关的临床药物的研发提供实验依据,本研究旨在揭示A3D8(一种抗CD44的单克隆抗体)对三种人卵巢癌CSC-LCs的细胞增殖、凋亡、致瘤性等生物学行为的影响作用及其分子机制。在我们的前期实验中,利用“无血清特殊生长培养基”(以DMEM/F12为基础培养基并添加多种因子)并采用“悬浮球培养法”分别从三种不同来源的样本(人卵巢癌细胞系SKOV-3;上皮性卵巢癌患者实体瘤组织；上皮性卵巢癌患者的腹水)中分选并鉴定出三种人卵巢癌CSC-LCs (S-CSC-LCs, T-CSC-LCs和A-CSC-LCs)。为全面探讨A3D8对人卵巢癌CSC-LCs的影响和机制,分别进行了以下体外和体内检测实验：细胞增殖MTS实验,软琼脂培养实验,细胞周期分析实验,AO/EB双重荧光染色、普通Giemsa染色及放大性Giemsa染色的显微镜检,Annexin V-FITC/PI双染的细胞凋亡流式检测,Rhodamine123染色的细胞线粒体跨膜电位(△ΨM)流式检测,实时荧光定量]RT-PCR,免疫印迹检测及动物体内实验。细胞表面分子CD44被A3D8封闭后,细胞增殖明显减弱；细胞的克隆集落形成能力被降低；G0/G1期细胞比例明显减少的同时S期的比例增加；细胞周期进程发生S期阻滞；细胞凋亡被显著增强,镜检发现细胞出现微核和典型的凋亡形态学改变。A3D8抑制增殖和诱导凋亡的作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。A3D8与DDP(一种卵巢癌铂类化疗药物)的联合使用可提高DDP抑制增殖和诱导凋亡的毒性作用。我们还发现A3D8作用后的CSC-LCs中的p21和caspase-3分子在mRNA和蛋白水平的表达增强,同时CDK2、cyclinA和bcl-2分子的表达降低。由此推论,A3D8在封闭细胞表面分子CD44后,可上调人卵巢癌CSC-LCs的细胞周期调控分子p21,它负向调控CDK2活性,减少CDK2/cyclinA复合物的形成,通过这种信号调节使细胞周期进程发生S期阻滞,从而明显抑制细胞增殖；而A3D8诱导凋亡的作用则是通过改变细胞线粒体的△ΨM和下调抑制凋亡蛋白bcl-2的表达等机制来完成的。结果还显示,A3D8可明显降低人卵巢癌CSC-LCs在NOD/SCID小鼠体内的致瘤性。研究结果支持抗CD44单克隆抗体A3D8被应用于新型的单克隆抗体肿瘤治疗,在卵巢癌术后用单抗靶向卵巢癌CSC,抑制其增殖、诱导其凋亡,从而减少原位肿瘤复发和腹腔转移；临床化疗用A3D8与DDP联合使用可增强化疗药物的毒性作用从而提高卵巢癌化疗的有效性。这些可以为卵巢癌靶向治疗策略的制定和临床治疗药物的研发提供有力的实验依据。