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目的：构建表达突变减毒的志贺样毒素Ⅰ（Shiga-like toxin 1，Stx1）的真核表达载体，考察其体内外抗人卵巢癌细胞SKOV3的活性及抗肿瘤血管生成的活性。方法：重叠PCR构建毒性为原毒素毒性1／10和1／100的突变减毒Stx1编码序列，T-A克隆并测序后分别连入真核表达载体pcDNA3.1。使用生物信息学方法分析Stx1的A、B亚基各自的信号肽编码序列。将突变减毒Stx1真核表达载体转染表达Stx1受体Gb3的SKOV3细胞和不表达Gb3的中国仓鼠卵巢细胞CHO，RT-PCR法检测Stx1基因在转染后细胞中的转录，观察SKOV3细胞和CHO细胞对转染的反应。建立稳定表达突变减毒Stx1的CHO细胞株，观察稳定表达突变减毒Stx1的CHO细胞株的培养上清对SKOV3细胞生长的影响。观察突变减毒Stx1对SKOV3细胞周期的影响和致SKOV3细胞死亡的方式。通过人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）增殖实验、损伤迁移实验、管腔形成实验观察突变减毒Stx1对HUVEC的抑制作用。使用SKOV3荷瘤裸鼠模型，不同毒性突变减毒Stx1真核表达载体经脂质体包裹后肿瘤局部注射给药，评价其体内抑瘤能力和对肿瘤新生血管的作用。在以上研究基础上，选择合适的突变减毒Stx1编码序列构建腺病毒载体。结果：突变减毒Stx1真核表达载体经酶切和测序鉴定与预期突变序列一致。生物信息学分析提示Stx1 A、B亚基的原有信号肽可以被真核细胞识别。RT-PCR证实转染后的SKOV3细胞和CHO细胞中存在目的mRNA。倒置相差显微镜下观察，可见许多转染后的SKOV3细胞肿胀、变圆，胞内出现空泡，部分细胞脱壁浮起，于48h内大量死亡。而镜下观察、流式细胞仪检测均未发现转染后的CHO细胞出现明显细胞死亡。获得稳定表达突变减毒Stx1的CHO细胞株，这些细胞株分泌的突变减毒Stx1能够在体外实验中抑制SKOV3细胞的生长，且该作用可以被Stx1 B亚基抗体阻断。体外实验观察到不同剂量的突变减毒Stx1真核表达载体转染可以使人卵巢癌SKOV3细胞的细胞周期阻滞于G2／M或S期，转染后SKOV3细胞死亡的主要途径是坏死。突变减毒Stx1还能够抑制HUVEC的增殖、迁移能力和管腔形成能力。体内实验显示突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤生长，并能够明显减少裸鼠体内SKOV3移植瘤的微血管密度。确定选用毒性为原毒素毒性1／100和1／1000的突变减毒Stx1编码序列用于携带突变减毒Stx1编码序列的腺病毒载体的构建，并已成功构建出相应的重组腺病毒。结论：第一，成功构建了编码1／10、1／100减毒活性的突变减毒Stx1的真核表达载体。第二，成功建立了分泌性表达突变减毒Stx1的CHO细胞株，揭示了减毒Stx1基因转染后的作用机制，证实Stx1 A、B亚基的天然信号肽可以被真核细胞识别，从而使该毒素能够被基因转移后的真核细胞分泌。第三，发现减毒Stx1基因转染可导致人卵巢癌细胞SKOV3细胞的细胞周期阻滞并可引起SKOV3细胞坏死。提示突变减毒Stx1抗肿瘤的机制至少包括引起肿瘤细胞坏死和诱导肿瘤细胞周期阻滞。第四，证明1／10、1／100减毒活性的突变减毒Stx1具有明显的抗肿瘤血管生成活性，体外实验中能够有效地抑制HUVEC的生长及正常功能的发挥，体内实验中突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤的血管生成。提示抗血管生成活性可能在减毒Stx1抑制肿瘤生长的作用中占据重要地位。第五，成功构建了携带1／100、1／1000减毒活性的突变减毒Stx1编码序列的重组腺病毒载体，为进一步研究不同减毒活性的突变减毒Stx1的抗肿瘤作用及其机制提供了重要工具。总之，本研究证明减毒Stx1能够通过抗肿瘤增殖作用和抗血管生成作用来抑制肿瘤生长，这一结果提示减毒Stx1基因有可能成为肿瘤基因治疗的理想候选者，为进一步开发以突变减毒Stx1为杀伤基团的新型基因工程抗肿瘤药物奠定了实验基础。