随着海洋科学的发展,海洋中的藻类及其衍生物海藻多糖因为具有较强的生物活性、开发价值和应用前景被科学界日益关注。但由于其易凝特点,在应用上受到限制,而其降解产物海藻寡糖分子量较小,易于被动植物利用,弥补了海藻多糖在应用上缺陷,因海藻寡糖多数靠海藻酸裂解酶降解海藻多糖而得到,因此本文主要研究酶解法制备海藻寡糖工艺优化,酶解液中海藻寡糖的提取,酶解液中海藻寡糖的定性、定量检测,酶解液中植物激素的定性定量检测。(1)海藻酸裂解酶粗酶液的制备及酶解条件的优化海藻酸裂解酶酶活检测:分别选取海藻裂解75%、100%、100%放置1 d、100%放置2 d、100%放置3 d提取粗酶液按10%的量加入到海带富集培养基中培养4 d,每天检测酶活并观察海带裂解情况,结果显示当海藻裂解75%时酶活较高且能使海带完全液化。因此通过以上实验可以确定海藻酸裂解酶应在海藻分解75%时提取且此时活性较好。酶解条件优化:实验通过对海藻酸裂解酶在不同的海带裂解培养基、震荡时间及海带浓度等4个方向上综合分析得到海藻酸裂解酶在有无机盐离子例如:硫酸铵、氯化钠等的培养基中海藻酸裂解酶活性相对较高且海藻寡糖的产量也是最高。酶解反应培养基中的最佳海带浓度为30%、温度为42℃、160 rpm一直振荡。(2)海带酶解液中海藻寡糖的分离和提取海带酶解液在5000 rpm下离心10 min后取上清液,首先加入考马斯亮蓝溶液,酶解液的上清液颜色变为蓝色,证明酶解液的上清液中含有一定量的蛋白质,然后分别加入乙醇、蛋白酶K、醋酸铅等物质,使酶解液中的蛋白质析出后利用比色法分别在280 nm和235 nm下检测上清液中的蛋白质和寡糖含量,其中蛋白酶K去除蛋白质率达到82.83%,醋酸铅溶液的仅为35.59%。结果显示蛋白酶K去除蛋白质的效果较好,但此种方法存在一定的弊端,例如它会使一些寡糖丢失。(3)海带酶解液中海藻寡糖检测方法的确立用硫酸-苯酚法在490 nm下检测葡萄糖、蔗糖、低聚果糖、葡聚糖、海藻酸钠、海藻寡糖六种糖的OD值。通过对数据处理发现海藻酸钠水解后OD值0.3995明显大于水解前OD值0.315,从而选取海藻酸钠作为标准曲线的标准品,再通过单因素变量探究检测体系、水解时间和温度以及冰浴时间后,确定最终的标准曲线为:y=348.13 x(R~2=0.9975)薄层层析(TLC)法:实验通过对酶解液水分含量和pH值的分析总结发现在浓缩25倍后pH=10时条带较清晰且有一定的迁移距离同时条带在二糖偏下的位置,推测酶解液中三糖多一些。(4)海带酶解液中植物激素的检测将酶解液在5000 rpm下离心10 min后取上清液,利用高效液相质谱与色谱法对酶解液中的三种植物激素(生长素、细胞分裂素、脱落酸)进行定性和定量检测,其中吲哚乙酸(IAA)0.60 ng/ml;细胞分裂素0.14824 ng/ml;脱落酸(ABA)0.027 ng/ml,海带酶解液中含有以上检测的三种植物激素,此海带酶解液可以作为生长刺激素应用到农作物上。