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在肥胖、糖尿病、粥样动脉硬化和腹主动脉瘤等代谢疾病发病机制中，肥大细胞起着重要的作用。小鼠肥大细胞蛋白酶4、6（mMCP4、mMCP6）是小鼠肥大细胞特异蛋白酶，在肥大细胞相关疾病生物学中具有关键的调控作用。但是，市场上并没有较好的商品化抗体，在一定程度上限制了这些肥大细胞蛋白酶细节作用机制的研究。因此，原核表达并制备这些蛋白酶的抗体，将有利于深入探讨肥大细胞的相关作用机制。本研究，构建了小鼠肥大细胞蛋白酶4(mMCP4)和6(mMCP6)的原核表达体系，诱导表达并纯化了包涵体蛋白，并通过多次皮下注射制备了兔抗mMCP4和兔抗mMCP6多克隆抗体。其具体方法包括：(1)提取小鼠脾细胞总RNA，运用RT-PCR技术获得目的基因mMCP4、 mMCP6；(2)构建重组原核表达载体pET28a-mMCP4、pET28a-mMCP6，将其转化到大肠杆菌BL21中，以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达；(3)利用Ni亲和层析柱纯化mMCP4、mMCP6融合蛋白；(4)纯化后重组蛋白作为抗原免疫兔子获得mMCP4多克隆抗体、mMCP6多克隆抗体；(5)采用ELISA法测抗体效价，western blot测抗体特异性。其具体结果表明：(1)经测序验证，所扩增目的基因mMCP4、mMCP6序列准确，所构建重组表达质粒pET28a-mMCP4、 pET28a-mMCP6成功；(2)经SDS-PAGE电泳验证，所诱导并纯化的mMCP4、mMCP6融合包涵体蛋白分子量符合预期，条带单一；(3)经ELISA测定，所得兔抗mMCP4血清和兔抗mMCP6血清效价分别达到1:128000和1:32000；(4)经western blot和免疫组化分析，表明mMCP4、mMCP6多克隆抗体具有较好的特异性。总之，通过克隆、原核表达和多次免疫，我们成功地获得两种具有良好的效价和特异性的抗体，可用于免疫学检测法，能满足利用之进一步研究肥大细胞的生物学功能的要求。