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目的：观察愈肝颗粒对二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine，DEN)所致大鼠肝癌模型的防治作用，并通过检测DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)、p16抑癌基因基因启动子甲基化水平，探讨愈肝颗粒抗实验性大鼠肝癌的作用机制。
方法：
①分组：将SD大鼠70只随机分为三组：空白对照组(10只)、模型对照组(30只)、愈肝颗粒组(30只)，每组均雌雄各半。
②造模与治疗：模型对照组、愈肝颗粒组腹腔注射DEN造模，以0.9％NaC1溶液配置成浓度为40mg/mL(4％)的DEN稀释液，按每次0.1mL/100g体重的剂量份额腹腔注射，每周2次，连续8周。空白对照组则腹腔注射与DEN等体积的生理盐水。愈肝颗粒组自注射DEN的当日开始，每日给予愈肝颗粒浸膏1mL/100g体重灌胃，而空白对照组、模型对照组则给予1mL/100g体重的清洁饮用水灌胃作对照治疗，1次/日。第8周末，处死动物、留取标本。
③指标检测：用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction，RT-PCR)法检测DNMTs水平、甲基化特异性PCR(methylation specific PCR，MSP)法检测p16抑癌基因基因启动子甲基化水平及用酶联免疫吸附测定(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)法检测甲胎蛋白(α-fetal proteion，AFP)水平，肝脏病理HE染色。
④统计学处理：用SPSS13.0统计软件处理，全部数据均用均数±标准差((X)±S)表示。计量资料采用单因素方差分析(第一步进行F检验，判断组间差异有无统计学意义，如F检验结果有统计学意义，则第二步进行组间两两比较)；计数资料采用x2检验。规定P<0.05为有统计学意义。
结果：
1．动物的一般情况：大鼠在给予DEN注射后，均不同程度地出现体毛干枯无泽、尿黄、活动及食量减少，大便溏泻等；但愈肝颗粒组大鼠较模型组一般情况好，上述症状较模型组轻。
2．肝组织肉眼及镜下观：
①空白对照组大鼠肝脏外观呈红褐色，质软，表面光滑；镜下肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常。
②模型对照组大鼠肝脏外观多呈暗黄、灰色，质地较硬，表面呈小结节状，凸凹不平；镜下癌细胞排列呈梁状或多板状或实性成片排列。
③愈肝颗粒组大鼠肝脏外观多呈暗红色，表面稍粗糙；镜下细胞排列基本规则，异形性不明显，有炎细胞分布于视野。
3．血清学指标的变化：
①甲胎蛋白(AFP)：模型对照组和愈肝颗粒组均较正常组升高，差异有显著性(P<0.01)，但愈肝颗粒组与模型对照组比较，两者差异亦有显著性(P<0.01)。
②愈肝颗粒对肝功能的影响：愈肝颗粒组、模型对照组与空白对照组比较均有显著差异性(P<0.01)；但愈肝颗粒组与模型对照组比较，两者差异亦有显著性(P<0.01)。
4．愈肝颗粒对DNMTs及p16抑癌基因基因启动子甲基化水平的影响：模型对照组DNMTs表达水平与空白对照组比较均显著升高(P<0.01)；愈肝颗粒组与模型对照组相比，DNMTs表达水平亦有显著性差异(P<0.01)；组内比较显示模型对照组、愈肝颗粒组中DNMT3A、DNMT3B在MSP阳性大鼠中均较阴性者升高(P<0.01)，而DNMT1下降(P<0.05)。
结论：
①DEN制作肝癌模型，具有造模周期短、成功率高、所形成的肝癌模型类似于人类肝癌的发病、损伤机理和病理特点，是研究肝癌发病与防治较理想的模型之一。
②愈肝颗粒可对大鼠肝癌的发生有防治作用，可改善血清AFP、影响DNMTs表达水平和p16抑癌基因基因启动子甲基化水平。
③愈肝颗粒可能通过调节DNMTs表达水平及调整p16抑癌基因基因启动子甲基化水平来发挥抗癌作用。