【摘 要】
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目的:检测CD147在正常人角质形成细胞株(HaCaT)钙诱导分化过程中的表达变化,并观察高钙培养和CD147抗体对HaCaT细胞分化相关形态学的影响;克隆CD147的编码基因并构建其真核表
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目的:检测CD147在正常人角质形成细胞株(HaCaT)钙诱导分化过程中的表达变化,并观察高钙培养和CD147抗体对HaCaT细胞分化相关形态学的影响;克隆CD147的编码基因并构建其真核表达载体.旨在了解CD147在角质形成细胞分化过程中的表达变化和作用,并为下一步利用基因转染技术研究CD147在角质形成细胞分化和增殖以及皮肤肿瘤浸润和转移中的作用机制奠定基础.方法:1.HaCaT细胞株先采用低钙DMEM培养液,第2次传代培养12h后,部分培养平皿内更换高钙DMEM培养液,部分低钙培养平皿内加入CD147抗体,提取细胞总蛋白用于免疫印迹分析,并分时段观察细胞形态学变化;2.运用经典的亚克隆技术构建CD147的真核表达载体:运用多聚酶链式反应(PCR)特异性扩增人类胎盘cDNA文库中CD147蛋白的编码基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,转染大肠杆菌DH5 α,筛选阳性克隆,双酶切鉴定重组质粒并通过DNA序列分析进一步证实.结论:(1)CD147分子与角质形成细胞的分化密切相关,是一种新的低分化角质形成细胞标志蛋白;(2)CD147分子可能可以抑制正常角质形成细胞的分化;(3)利用经典的亚克隆技术能够成功地构建出CD147的真核表达载体.
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