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目的本研究利用黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发大鼠形成肝癌模型,检测诱癌过程中不同时间点肝组织中的微小染色体维持蛋白7(minichromosome maintenance complex component7, MCM7)基因与细胞周期素B(1cyclin B1)基因的mRNA和相关蛋白,动态观察MCM7与cyclinB1基因的表达情况,以探讨MCM7与cyclin B1基因在肝癌发生过程中的变化及意义。方法1.实验标本:实验组为15只在第70周经病理组织学确认形成肝癌大鼠(来自前期利用AFB1诱发大鼠形成肝癌实验的AFB1组);对照组为10只未成癌大鼠(来自前期实验的对照组),均为未予以AFB1处理的正常动物。2.标本采集:全部大鼠在诱癌过程中的第10周、30周、50周行肝活检取肝组织,第70周处死取肝组织。切取的肝组织一部分用液氮速冻保存,另一部分用中性福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋。3.标本检测:采用实时荧光定量PCR(RFQ-RT-PCR)、蛋白质免疫印记杂交技术(Westerrn blot)和免疫组化方法分别检测不同时间点大鼠肝组织中MCM7与cyclin B1基因的mRNA和相关蛋白表达水平,动态观察其变化情况,分析基因表达意义。结果1. MCM7基因的mRNA和蛋白的表达情况基本一致,且随着大鼠肝癌的形成,MCM7mRNA和蛋白的表达水平逐步升高,且以在肝癌形成的第70周表达水平最高。实验组内,第50周蛋白阳性率为26.7%且以弱阳性为主,第70周蛋白阳性率为100%且多为强阳性,第50周、70周分别与其他时间点比较,其表达差异有统计学意义(P <0.05);对照组中各时间点的表达水平均较低且稳定(P>0.05);实验组与对照组比较,第50周、70周表达差异有统计学意义(P <0.05)。2. cyclin B1mRNA和蛋白的表达,在实验组第70周肝组织中明显高于其他时间点和对照组(P <0.05),但蛋白表达先于mRNA表达,于肝癌形成前(实验第50周)开始升高。实验组中第50周、70周蛋白阳性率为26.7%、66.7%,第50周、70周蛋白表达均与其他时间点差异显著(P <0.05);组间比较,第50周、70周表达均差异显著(P <0.05);而实验组其他时间点及对照组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.在大鼠肝癌形成过程中,MCM7表达无论在mRNA水平还是蛋白水平均呈上升趋势且高于正常组织,提示MCM7与肝癌的发生密切相关,MCM7有可能是参与肝癌发生的关键基因之一。2.在肝癌发生过程中,cyclin B1的mRNA和蛋白的表达均在肝癌组织中表达最高,或许cyclinB1与肝癌的发展相关,cyclin B1可能参与肝癌的形成。