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前言 肾母细胞瘤是儿童最常见的肾脏恶性肿瘤之一，其预后通常较好，而不良预后常与较低的病理分化类型或间变型相关。通常，恶性肿瘤的生长率依赖于癌细胞的增殖与死亡，持续性细胞死亡是恶性肿瘤的一个内在特征，主要通过坏死和凋亡。凋亡是在胚胎发育和成熟组织更新过程中保持细胞数目的生理性细胞死亡形式。核和细胞质固缩，膜结合凋亡体的形成不伴炎性浸润，以及DNA寡核苷酸梯度降解是区别凋亡与坏死的特征。 bcl-2原癌基因的过度表达抑制凋亡导致细胞死亡的减少，从而使细胞数增加，在肿瘤的发展中扮演重要的角色。bcl-2过度表达常发生于如前列腺癌，肺癌，肾癌等上皮样肿瘤中。最近研究发现bcl-2表达和凋亡的关系在神经母细胞瘤中呈负相关关系。 这一研究设计用于分析肾母细胞瘤中凋亡，bcl-2表达情况及两者间的相互关系。 材料和方法 收集中国医科大学附属二院病理科1995年1月至2001年2月肾母细胞瘤组织蜡块40例，另癌旁正常组织9例。手术切除平均年龄54个月。HE染色，经2名病理学专家进行组织病理分型。 凋亡指数测定采用原位细胞末端转移标记法（ISEL法）。原位细胞凋亡试剂盒购自华美生物工程有限公司。常规脱蜡入水，切片用新鲜配制的3％H2O2水溶液灭活内源性酶，PBS水洗5分钟3次；30μg/ml蛋白酶K37℃消化45分钟后双蒸水洗5分钟3次；加标记缓冲液室温20分钟，甩干后将TdT，Biotin-11-dUTP和标记缓冲液的混合液加于切片上，37t60分钟后用2 XSSC浸泡，PBS水洗3分钟3次；封闭液室温封闭半小时，然后将配制的Avidin－HRP37 t标记切片一小时，PBS水洗 3分钟 3次；DAB或AEC显色，苏木素复染，封片镜检。TDT去除液用于阴性对照，用断奶4天后的母鼠乳腺作为阳性对照。 bCI－2表达检测采用 ABC法，bCI－2即用型 SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。常规脱蜡人水，切片用新鲜配制的 3％H刃。水溶液以灭活内源性酶，双蒸水洗 3次；滴加复合消化液 10分钟，双蒸水洗 3次；用正常山羊血清封闭液室温 20分钟后甩去多余液体不洗，滴加小鼠抗人比一2单克隆抗体，4℃过夜，PBS水洗2分钟3次；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，室温20分种 PBS水洗2分钟3次；滴加 SABC，37℃20分钟 PBS水洗5分钟4次；DAB显色，苏木素复染，常规封片镜检。以PBS代替一抗作阴性对照，试剂盒中阳性对照片用于阳性对照。 DAB染色时，细胞核（细胞凋亡）或细胞浆中什一2表达)有棕黄色颗粒者为阳性细胞；AEC染色时有桃红色颗粒者为阳性细胞。凋亡细胞计数用凋亡系数（AI）表示，计数400倍镜下凋亡细胞与正常细胞的比值，每张切片从其主要病理类型中选择10个视野用于分析，以每张切片的平均计数用于统计分析。 实验结果 肾母细胞瘤中胚基型的三种分化程度的凋亡指数间不存在统计学差异JH中的各病理分型间也不存在统计学差异。但FH与UH＊H与正常对照间存在显著统计学差异，而UH与正常对照间无统计学差异。 胚基型肾母细胞瘤中＊－2表达在高，中分化间不存在统计学差异；高，低分化间和中，低分化间存在统计学差异。胚基型和间质型间h—2表达不存在统计学差异。UH与FHpH与正常 ·2·对照间表达存在统计学差异＊H与正常对照间不存在统计学差异。 讨 论 我们的研究显示在预后较好的病理组织分型（FH）中，无论是胚基型的高，中，低三种分化类型间，还是间质型与胚基型间的AI值均不存在显著的统计学差异。其中，胚基型的三种分化间F＝2．64，P＝0．09＞o．05；胚基型与间质型间F＝3．gM，P＝O．054＞0．05。这与肾母细胞瘤的这几种病理组织类型的预后生存率无明显差异吻合。然而，在间变型（UH）的3例中AI值很小，与FH间有着显著的统计学差异(F＝38．化6，P＜O．01人这就提示了在间变型的肾母细胞瘤中控制凋亡的机制被破坏，从而导致其恶性度增高，使其极差的预后明显区别于 FH85％以上的生存率。由此，我们可以假设在肾母细胞瘤中降低的凋亡指数（AI）与差的预后存在相关关系。 BCI－2基因是在研究B一细胞淋巴瘤时发现的一种癌基因，现已证明h－2是最重要的抑制细胞凋亡的基因，bCI－2基因的过度表达并不影响细胞增殖和加速细胞分裂，而是通过延长肿瘤细胞生存，阻止细胞凋亡的发生。在我们的研究中，胚基型三种分化与h－2表达呈负相关，r值为一0．541／值为0．0001，整个构成 tL X’＝11．287，P＝0．024＜0．05；高，中分化间 X‘值为 2．430，P值为 0．297＞0．05 ；胚基型与间质型间 bCI－2表达构成匕X’值为 1．365f值为口．590；两者阳性表达率问 P＝0．526。FH与UH间 bCI－2表达构成比 X‘值为 5．868，P值为 0．049；阳性表达率间 P＝0．048。FH与正常对照间 bCI一二表达构成比 X‘值为 1．365J值为 0．505；＊性表达率间 P＝0．270。UH与正常对照间bCI－2表达构成比 X‘值为 7