产多糖海洋微藻筛选、培养及其多糖提取与抗氧化性研究

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多糖(polysaccharide)是一类生物大分子,常以糖蛋白、糖脂和蛋白聚糖等形式存在和参与生命活动,其抗肿瘤、抗氧化、抗菌等功能在医药、食品和化妆品等行业中具有应用潜力。海洋高盐环境中的微藻,能够产生某些结构和功能较陆生植物所产多糖而言更为独特的胞内多糖,近年来受到广泛关注。本论文采集广西北海的海水样品,经过TAP-海水培养基的富集培养,平板涂布及划线分离得到18株微藻,再经过生长曲线、生物量及多糖含量测定,筛选出生长周期短、生物量大、多糖含量高的BH95,根据形态学和叶绿体rbcL基因序列分析,确定为小球藻(Chlorella)。单因素试验表明BH95在光周期为21:3(光照:黑暗时间,h)、光强4000lux、25℃,起始pH 7.0条件下,积累更多生物量和多糖。正交试验优化发现BH95在葡萄糖1.08g/L,尿素0.20g/L,MgSO4·7H2O0.125g/L的营养条件下,生物量达到1.416g/L,多糖含量为198.050 mg/L,分别是优化前的1.85倍和1.58倍。采用热碱浸提法提取BH95的胞内多糖,响应面法Box-Behnken试验优化提取条件。NaOH质量分数1.60%、提取温度74.5℃、提取时间3.00 h、料液比(m/V)1:25,乙醇体积分数95%,醇沉比(V/V)1:3,此条件下,BH95胞内多糖得率达到6.811%,比优化前的多糖得率提高了165.12%。初步纯化的BH95胞内多糖,在体外对DPPH自由基、羟基自由基有清除作用,且有一定总还原能力,可用作抗氧化剂。
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