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T淋巴细胞在免疫反应中起着重要的作用，其中之一是细胞毒性反应，即T淋巴细胞通过裂解作用杀伤表达特异性抗原的异常细胞。具有这种细胞毒性作用的T细胞的表面抗原大部分是CD8阳性，被称为细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs）。CTLs能够清除机体内病毒、细菌和寄生虫感染的细胞，杀伤肿瘤细胞，也能在同种异体移植免疫反应过程中起排斥作用。CTLs识别抗原递呈细胞（antigen presenting cells，APCs）表面的MHC I类分子与抗原肽形成的复合体，目前已知与MHC I类分子结合的抗原肽无论来自肿瘤抗原或其它外源病原微生物抗原都是含8-11氨基酸的短肽，该短肽与MHC I类分子非共价结合，位于抗原递呈细胞的表面，被CTLs表面的T细胞受体（T-cell receptor，TCR）识别而诱导产生CTL反应。抗原特异性CTLs的定量或定性检测无论对临床诊断、疫苗免疫或免疫抑制治疗后进行的疗效评估都是至关重要的手段。 许多实验室通过对TCR及其配体的研究发现它们之间的相互作用很弱(10-4～10-7M)，且解离速度很快，半衰期只有几秒钟，使得CTLs的检测非常困难。目前体外检测抗原特异性CTL反应的方法主要有以下4种：（1）51Cr释放分析法；（2）检测CTLs分泌的细胞因子法；（3）针对特异性TCR的PCR法：（4）利用可结合于TCR的荧光抗原标记CTLs的可溶性MHC-肽四聚体分析法。由于前两种方法需要在体外进行细胞增殖培养，可因多种因素造成CTLs的检测结果偏低，且检测步骤复杂，临床实用性差；第三种方法基于PCR技术，其敏感性高，但是仅仅局限于已知TCR基因型的特异性CTLs的检测：最后一种四聚体分析法于近年来兴起，已被较广泛地应用，是直接检测抗原特异性CTLs的方法，该方法用四价MHC-肽复合物减慢了其与TCR的解离率，同时利用流式细胞仪技术大大增强了敏感性，但是仍然没有从根本上克服解离率快这一限制CTLs检测方法发展的关键问题。 在本研究中，我们设计了新的直接检测人外周血抗原特异性CTLs的方法，