论文部分内容阅读
目的: 研究绿茶、红茶水提取物对大鼠细胞色素P450(CYP450)亚型CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的诱导或抑制作用，为临床合理用药提供理论依据。 方法: 第一部分:建立LC-MS同时测定非那西丁、安非他酮和咪达唑仑三种探针药血浆内浓度的方法 色谱柱:Agilent Zoxbax SB-C18柱;柱温:30℃;流动相:流动相A（0.1％甲酸溶液）和流动相B（乙腈）;采用梯度洗脱程序:0至1.0分钟(10-10％B)，1.0至4.0分钟(10-80％B)，4.0至7.0分钟(80-80％B)，7.0至9.0分钟(80-10％B)，9.0至13.0分钟(10-10％B);流速为0.4 ml//min。质谱条件:ESI，正离子检测，雾化器压力设为25psi，毛细管电压设为3500V，干燥气(N2)流速设为7L/min，干燥气温度设为350℃。使用SIM测定目标离子:非那西丁m/z180，安非他酮m/z240，咪达唑仑m/z326，卡马西平（内标）m/z237。定量方法采用峰面积法。空白血浆100μ L于1.5mL EP管中，加入含100ng·mL-1卡马西平的乙腈200μ L，漩涡混匀60秒。接着13000r·min-1离心10min，取上清液200μL于自动进样器的样品瓶中，设定5μ L进样检测。 第二部分：运用Cocktail探针药物法评价不同茶水提取物对CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的影响 健康雄性SD大鼠18只随机分成3组，每组6只，分为红茶组、绿茶组和对照组。红茶组大鼠每日早上灌胃给予红茶水提取物(9％，w/v)9mL·kg-1;绿茶组大鼠每日早上灌胃给予绿茶水提取物(9％，w/v)9mL·kg-1;对照组大鼠每日灌胃给予纯水9mL·kg-1，持续灌胃14天。于第15天早上灌胃给予三种探针药物混合溶液(非那西丁、安非他酮和咪达唑仑各10mg·kg-1)。分别于给药开始前、给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12h取大鼠尾静脉血0.3mL处理。液质联用色谱法分析各点探针药的血药浓度，用药物与统计软件Drug AndStatistics version2.0(DAS)分析药代动力学参数，实验数据皆用平均数±标准偏差((x)±SD)表示，用Statistical Product and Service Solutions version19.0(SPSS)软件对各项数据资料进行统计分析，对照组与红茶组、对照组与绿茶组之间的比较采用独立样本t检验，检验水准α为0.05，并绘制药物浓度-时间曲线图。 结果: 1.血浆样品经LC-MS分析测定得到的色谱图，三种探针药物与内标卡马西平分离较好。保留时间非那西丁为5.3min，安非他酮为5.0min，咪达唑仑为5.3min，卡马西平为3.7min。非那西丁在50-10000ng·ml-1浓度范围内线性关系良好，检测限为50ng·ml-1。安非他酮和咪达唑仑在10-2000ng·ml-1浓度范围内线性关系良好，检测限为10ng· ml-1。低、中、高浓度三种探针药物日内精密度RSD均小于7％，日间精密度RSD均小于9％。低、中、高浓度三种探针药物的相对回收率均在93-103％，绝对回收率均大于80％。血浆样品在室温放置和冰冻保存的条件下，均有很好的稳定性。本方法具有较高的专属性。 2.不同茶水提取物对CYP1A2探针药非那西丁在大鼠体内药动学参数的影响:对照组、红茶组和绿茶组非那西丁血药浓度曲线下面积AUC(0-t)分别为(17002.17±2986.06)ng·mL-1·h、(14661.42±2663.30)ng·mL-1·h和(14588.26±4837.08)ng·mL1·h，AUC（0-∞）分别为(17988.76±2823.23) ng·mL-1·h、(14991.77±2891.30)ng·mL-1·h和(15242.65±5115.16)ng·mL-1·h;半衰期(t1/2z)分别为(0.85±0.37)h、(0.60±0.24)h和(0.77±0.34)h;清除率(Clz/F)分别为(0.57±0.07) L·h-1·kg-1、(0.69±0.13)L·h-1·kg-1和(0.71±0.20)L·h-1·kg-1;血药浓度峰值(Cmax)分别为(10089.74±2140.69) ng·mL-1、(9422.61±2077.08) ng·mL-1和(12027.10±2971.63) ng·mL-1。红茶组、绿茶组分别与对照组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2z、CLz/F和Cmax比较均无统计学意义(P＞0.05)。 3.不同茶水提取物对CYP2B6探针药安非他酮在大鼠体内药动学参数的影响:对照组、红茶组和绿茶组安非他酮血药浓度曲线下面积AUC(0-t)分别为(1858.30±594.16) ng·mL-1·h、(1500.15±360.66) ng·mL-1·h和(1055.07±251.32) ng·mL-1·h,AUC(0-∞)分别为(2007.90±673.98) ng·mL-1·h、(1704.08±479.71) ng·mL-1·h和(1243.71±229.27) ng· mL-1·h;半衰期(t1/2z)分别为(3.33±0.49)h、(5.07±2.48)h和(4.85±1.50)h;清除率(Clz/F)分别为(5.40±1.57) L·h-1·kg-1、(6.25±1.64)L·h-1·kg-1和(8.25±1.36)L·h-1·kg-1;血药浓度峰值(Cmax)分别为(529.62±128.42) ng·mL-1、(573.08±103.81) ng·mL-1和(322.22±55.47) ng·mL-1。红茶组与对照组的AUC(0-t)、AUC（0-∞）、t1/2Z、CLz/F和Cmax比较均无统计学意义(P＞0.05)。绿茶组的AUC(0-t)和Cmax显著低于对照组(P＜0.05)，Clz/F显著大于对照组(P＜0.05)，AUC(0-∞)和t1/2Z与对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。 4.不同茶水提取物对CYP3A4探针药咪达唑仑在大鼠体内药动学参数的影响:对照组、红茶组和绿茶组咪达唑仑血药浓度曲线下面积AUC(0-t）分别为(2412.45±794.71)ng· mL-1·h、(1324.04±331.55) ng·mL-1·h和(2199.73±958.37) ng·mL-1·h，AUC(0-∞)分别为(2740.65±1158.38) ng·mL-1·h、(1373.41±337.64)ng·mL-1·h和(2467.63±1152.62) ng·mL-1·h;半衰期(t1/2Z)分别为(1.07±0.62)h、(0.79±0.28)h和(1.12±0.28)h;清除率(Clz/F)分别为(4.23±1.76)L·h-1·kg-1、(7.65±1.86)L·h-1·kg-1和(5.07±2.92)L·h-1·kg-1;血药浓度峰值(Cmax)分别为(1526.61±677.48) ng·mL-1、(1013.59±270.47) ng·mL-1和(1390.64±324.77) ng·mL-1。红茶组的AUC(0-t）和AUC（0-∞）显著低于对照组(P＜0.05)，C1z/F显著大于对照组(P＜0.05)，t1/2Z和Cmax与对照组比较比较无统计学意义(P＞0.05)。绿茶组与对照组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2Z、CLz/F和Cmax比较均无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 1.本研究采用的液相色谱-质谱联用检测方法快速、简便、灵敏、准确可靠，适用于非那西丁、安非他酮和咪达唑仑的同时测定及其药代动力学研究。 2.红茶水提取物诱导CYP3A4酶活性，不影响CYP1A2和CYP2B6酶活性;绿茶水提取物诱导CYP2B6酶活性，不影响CYP1A2和CYP3A4酶活性。