(制)何首乌对血虚模型大鼠补血作用机制研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:gulongliu
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背景:何首乌,又称首乌、赤首乌,为寥科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb的干燥块根。成分主要有二苯乙烯苷类化合物,蒽醌类化合物(主要为大黄素、大黄酚、大黄酸等葡萄糖苷),磷脂类(卵磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸等),黄酮类化合物,微量元素钙、铁、锌、锰、铜等。根据其炮制方法不同又有生首乌与制首乌之分。生首乌味苦、涩、性平,具有润肠、解毒、截疟之功效,用于肠燥便秘,痈疽瘰疬等症。制首乌味苦、甘、涩、性温,具有补肝肾、益精血、壮筋骨、乌须发之效,主要用于肝肾精血亏虚、头昏目眩、须发早白、腰膝酸软及遗精等症。目的:1.通过研究(制)何首乌及其主要成分对造血祖细胞增殖的影响,从细胞水平评价制首乌的补血功能。2.通过研究不同采血时间点含药血清对造血祖细胞增殖的影响,为进一步研究制首乌药效物质基础奠定基础。3.通过研究何首乌对骨髓细胞凋亡、周期及黏附分子表达,红细胞膜带3蛋白酪氨酸磷酸化表达的影响,探索制首乌补益精血的分子机制。方法:1.体内给药,观察生何首乌,制首乌高、中、低剂量及其主要单体成分对血虚模型大鼠外周血象的影响。2.体外细胞半固体培养,观察生、制何首乌全药及其主要单体成分对大鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM增殖的影响。3.正常大鼠灌胃制首乌药液,连续4天,末次给药后5min、15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、10h和24h采集血清,分别观察经乙醇沉淀处理的含药血清及未经处理的含药血清对大鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM增殖的影响。4.连续灌胃给药9天,利用流式细胞术观察(制)何首乌对血虚模型大鼠骨髓细胞黏附分子CD44、CD54及红细胞膜黏附分子CD35表达的影响。5.连续灌胃给药9天,观察(制)何首乌对血虚模型大鼠骨髓细胞凋亡及骨髓细胞周期的影响。6.利用western blotting技术,观察(制)何首乌对血虚模型大鼠红细胞膜带3蛋白酪氨酸磷酸化表达的影响。结果:1.体内给药发现,生首乌及制首乌低剂量(1g/m1)对血虚模型大鼠的造血功能没有改善作用,制首乌中(2g/m1)、高(4g/m1)剂量均对造血系统有改善作用,其中中剂量的改善作用最明显。2.生、制首乌全药体外对CFU-GM细胞增殖没有明显的促进作用。何首乌单体成分大黄素甲醚、大黄素、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷及大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷体外能促进CFU-GM细胞增殖,以低浓度作用较为明显。3.制首乌含药血清能促进大鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM细胞增殖,生首乌含药血清对CFU-GM细胞的增殖作用不明显。经乙醇沉淀处理的1.5h制首乌含药血清对CFU-GM细胞增殖作用最明显,未经处理的1h制首乌含药血清对CFU-GM细胞增殖作用最明显。4.制首乌能明显降低由造模引起的骨髓细胞黏附分子CD54及红细胞膜CD35的高表达。5.生、制首乌均能加速血虚模型大鼠骨髓细胞由G1期向S期转化。6.生、制首乌均能增强血虚模型大鼠红细胞膜带3蛋白酪氨酸磷酸化。结论:制首乌具有改善血虚模型大鼠造血功能的作用,其作用可能是通过促进造血祖细胞CFU-GM增殖,调节骨髓细胞及红细胞膜黏附分子表达,加速骨髓细胞由G,期向S期细胞转化,修复受损红细胞实现的。
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