积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科(Umbelliferae)积雪草属(Centella)植物,是中国药典收载的常用中药。性寒、味苦、辛;具有清热利湿、解毒消肿的功效。积雪草苷和羟基积雪草苷为积雪草中三萜皂苷类有效成分,具有抗氧化、抗菌、抗抑郁、调节免疫等多种药理活性功能。为了更好地利用积雪草资源,充分研究其中各成分的药理活性,分离和大量制备高纯度积雪草苷、羟基积雪草苷十分必要。本论文系统研究了从积雪草原料药中分离提取积雪草苷、羟基积雪草苷的工艺条件,经破碎、脱脂醇提硅胶柱层析、制备色谱等分离纯化方法,得到了可用于针剂的高纯积雪草苷和羟基积雪草苷。采用化学破碎法中的酸-热法、碱-热法及物理方法中的温度差法对三叶草细胞及积雪草细胞进行破碎,用电子显微镜观察破碎情况,发现酸-热与碱-热均能对细胞进行部分破碎,而温度差法也能对细胞进行破碎,但是破碎效果不及前两种方法。再以细胞破碎为前提,对积雪草进行提取,并与传统的提取方法—乙醇热回流法相比较。以积雪草苷和羟基积雪草苷为检测对象,结果显示,酸-热法与碱-热法提取效果均优于传统提取方法,且碱-热法优于酸-热法。采用超声辅助提取积雪草苷。超声使细胞膜产生空穴作用,导致溶液内气泡的形成、增长和爆破压缩,从而使细胞内物质分散,增大了细胞内物质与萃取溶剂之间的接触面积,提高目标物从植物细胞转移到液相的传质速率,使胞内有效物质的溶出率提高。通过正交实验确定了乙醇热回流法、酸碱法和超声法的较佳提取工艺。课题选用先醇提再脱脂的方法将积雪草皂苷富集于正丁醇相,得到积雪草粗皂苷。再采用硅胶柱层析,分离得到纯度为96.52%的积雪草苷及纯度为94.21%羟基积雪草苷。经过重结晶纯化,将积雪草苷与羟基积雪草苷分别纯化至97.94%及98.12%。由于国外对针剂的要求为单一物质纯度在99%以上,但是积雪草苷和羟基积雪草苷结构相近,为了得到更高纯度的目标化合物,采用制备色谱分离积雪草粗皂苷。优选工艺,得到积雪草苷和羟基积雪草苷的纯度分别为99.07%及99.36%可以满足针剂对原料药的纯度要求。