【摘 要】
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目的:分析慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌患者外周血单个核细胞中TIPE2、FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达情况,探讨TIPE2、FOXP3及CTLA-4在不同肝脏疾病发生和发展中的意义。方法:1.病例选择收集来自2020年10月至2021年11月河北医科大学第三医院中西医结合肝病科门诊及住院患者80例,其中慢性乙型肝炎（慢性肝炎）患者28例,乙肝肝硬化（肝硬化）患者28例,乙肝病毒相关肝细胞癌
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目的:分析慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌患者外周血单个核细胞中TIPE2、FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达情况,探讨TIPE2、FOXP3及CTLA-4在不同肝脏疾病发生和发展中的意义。方法:1.病例选择收集来自2020年10月至2021年11月河北医科大学第三医院中西医结合肝病科门诊及住院患者80例,其中慢性乙型肝炎（慢性肝炎）患者28例,乙肝肝硬化（肝硬化）患者28例,乙肝病毒相关肝细胞癌（肝细胞癌）患者24例,诊断标准依据2019年《慢性乙型肝炎防治指南》、《肝硬化诊治指南》以及2017年《原发性肝癌诊疗指南》,所有入组患者1年内均未应用免疫调节药物治疗。同时排除合并其他病毒性肝炎重叠感染以及其他肝脏疾病或其他系统严重疾病者。同期选择我院体检中心20例健康志愿者作健康对照。所有患者及志愿者抽取空腹抗凝静脉血7至10ml,用于分离外周血单个核细胞检测。2.研究方法收集入组患者及健康志愿者的临床资料及实验室指标,分析比较不同肝脏疾病患者间的差异。同时收集入组患者及健康志愿者的外周血7至10ml,Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs,应用Trizol一步法提取PBMCs中的总RNA,反转录呈c DNA,应用实时荧光定量PCR法检测TIPE2、FOXP3和CTLA-4 mRNA的表达情况,并比较各组间的差异。应用SPSS 21.0统计学软件,组间比较采用t检验或单因素方差分析比较组间差异,Pearson分析TIPE2、FOXP3及CTLA-4与临床指标的相关性。结果:1.不同肝脏疾病与健康对照组中TIPE2、FOXP3及CTLA-4mRNA的表达:慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌患者TIPE2 mRNA的表达水平低于健康对照组,肝细胞癌患者TIPE2 mRNA的表达低于慢性肝炎、肝硬化患者。慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌患者FOXP3、CTLA-4mRNA的表达水平高于健康对照组,肝细胞癌患者FOXP3、CTLA-4mRNA的表达高于慢性肝炎、肝硬化患者。2.TIPE2、FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达水平与肝细胞损伤程度的关系:ALT、AST异常组TIPE2 mRNA的表达低于ALT、AST正常组,TBil异常组TIPE2 mRNA的表达与TBil正常组无统计学差异。FOXP3、CTLA-4 mRNA的表达水平在ALT、AST及TBil异常组明显高于ALT、AST及TBil正常组。3.TIPE2、FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达水平与临床指标相关性分析:TIPE2 mRNA的表达与WBC、N、NLR及PLR呈负相关,与L、PLT呈正相关。而FOXP3、CTLA-4 mRNA的表达与WBC、N、NLR及PLR呈正相关,与L、PLT呈负相关。TIPE2 mRNA的表达与ALT、AST呈负相关,而FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达与ALT、AST呈正相关。4.TIPE2 mRNA的表达与FOXP3、CTLA-4 mRNA的表达呈负相关。结论:1.TIPE2、FOXP3及CTLA-4参与了慢性肝炎发展至肝硬化、肝细胞癌的进展过程。2.TIPE2 mRNA的表达与ALT、AST及NLR、PLR呈负相关,提示TIPE2可减轻肝细胞损伤,负性调控慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌患者的炎症反应,在一定程度上减轻肝细胞受损程度。3.FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达与ALT、AST及NLR、PLR呈正相关,提示FOXP3及CTLA-4可通过调节Treg细胞功能促进慢性炎症反应并加重肝细胞受损。4.TIPE2 mRNA的表达与Treg细胞表面标志性分子FOXP3及CTLA-4 mRNA的表达呈负相关,提示TIPE2作为免疫负调控分子可能通过调控FOXP3及CTLA-4的表达,从而影响Treg细胞的免疫功能,在肝脏疾病的发生和发展中发挥一定的作用。
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